转基因油菜筛查阳性质粒分子的研制及应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李俊

作者： 李俊;李夏莹;王颢潜;翟杉杉;陈子言;高鸿飞;李允静;吴刚;张秀杰;武玉花

作者机构：

关键词： 转基因油菜;筛查;筛查策略;阳性质粒分子;应用

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2020 年 07 期

页码： 1322-1337

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】转基因油菜是四大转基因作物之一,是中国转基因生物安全监管的重要对象,转基因检测为转基因安全监管提供技术支撑。转基因筛查是转基因检测的第一步,筛查靶标设置不合理会导致漏检部分转基因成分。建立转基因油菜筛查策略,并研制与筛查策略配套的阳性质粒分子,将为中国的转基因油菜安全监管提供强有力的技术支撑。【方法】通过收集数据库中登记的转基因油菜品种的外源基因元件信息,分析转基因油菜品种中常用的调控元件和标记基因,基于最大筛查覆盖率原则,确定转基因油菜的筛查靶标。通过检索数据库或查询专利,收集筛查元件的核苷酸序列。一个筛查元件通常有多个标准方法,查阅各筛查元件的检测标准,分析各标准中普通PCR引物对和实时荧光PCR引物/探针组合在筛查元件核苷酸序列中的位置,根据引物探针的结合位点,确定拟构建到质粒上的各筛查元件的核苷酸序列。人工合成各筛查元件和油菜内标基因的融合序列,克隆到常用质粒pUC18,构建阳性质粒分子。采用各筛查元件的普通PCR和实时荧光PCR方法,评估阳性质粒分子的适用性。【结果】建立了转基因油菜的筛查策略,通过检测CaMV 35S启动子、FMV 35S启动子、Bar、PAT、CP4-EPSPS、NPTⅡ、HPT、NOS终止子和PinⅡ终止子共9个基因元件,可实现已知信息转基因油菜品种的全覆盖。构建出聚合9个筛查元件和2个油菜内标基因HMG I/Y和CruA的转基因油菜筛查质粒分子pYCSC-1905。9个筛查元件和2个油菜内标基因的扩增效率均在90%—110%,证明质粒分子上的不同靶标序列没有相互干扰,影响PCR的扩增效率。质粒分子pYCSC-1905可用作9个筛查元件和2个油菜内标基因的通用阳性对照,适用于国家标准(GB/T和农业农村部公告)、出入境检验检疫行业标准(SN/T)和欧盟标准。【结论】提出的转基因油菜筛查策略涵盖9个基因元件,可实现从商业化到安全评价各阶段转基因油菜的筛查检测,显著降低转基因油菜的筛查漏检率。研制的配套质粒分子pYCSC-1905为转基因油菜筛查和各基因元件标准方法的应用提供了通用标准样品,保证检测机构间检测数据的准确性和可比性。

分类号： S565.4

  • 相关文献

[1]转基因水稻筛查检测阳性质粒pUC18-RICE-screen的构建及分子评价. 马卉,焦小雨,许学,李夏莹,陈子言,吴爽,潘伟芹,张秀杰,汪秀峰. 2020

[2]植酸酶基因定性PCR检测方法及阳性质粒分子的构建. 李俊,刘信,曹应龙,武玉花,厉建萌,吴刚,张丽,卢长明. 2012

[3]应用多重PCR技术快速筛查食品中的转基因成分. 董立明,邢珍娟,李葱葱,夏蔚,闫伟,李飞武. 2017

[4]蛋白质组学方法在玉米螟蛋白质研究中的应用. 张效梅,王创云,孙贵臣. 2008

[5]孤独症筛查量表在早期识别孤独症谱系障碍中的临床价值. 韦秋宏,谢小芬,戴婧婧,余阳,张渝,程茜. 2021

[6]发育性髋关节发育不良的早期筛查及保守治疗现状. 陈河舟,南国新. 2020

[7]高效液相色谱-三重四极杆-离子阱串联质谱法在食品分析中的应用. 杜兴兰,李淑静,牟慧,姜楠. 2019

[8]重庆乡镇0～3岁儿童先天性心脏病筛查与随访. 张蕾,安美玉,朱冰,申宛冬,谭书江,计晓娟,田杰,刘晓燕. 2017

[9]多重PCR筛查检测进口转基因玉米. 李忆,宋君,侯雪,王东,张富丽,刘文娟,常丽娟,雷绍荣. 2016

[10]四种转基因玉米多重PCR检测方法的建立. 李忆,宋君,王东,张富丽,刘文娟,常丽娟,雷绍荣,刘勇. 2016

[11]高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱技术非靶向快速筛查荔枝花、蜂巢和蜂蜜中农药. 王思威,孙海滨,刘艳萍,曾广丰,王潇楠,常虹,曾鑫年. 2021

[12]超快速液相色谱-串联质谱法快速筛查蔬菜中176种农药的残留量. 郑姝宁,李凌云,林桓,赵文,张延国,姚周麟,刘肃. 2013

[13]新疆褐牛核心群母牛蜘蛛腿综合征的遗传检测. 席艾力·依明,王雅春,黄锡霞,田可川,田月珍,郭俊清,谭世新,付雪峰,热伊莱·伊卜拉伊木. 2012

[14]气相色谱-质谱联用检测农药制剂中8种有机溶剂类助剂的含量及市场样品筛查. 林琴,周利,张新忠,楼正云,罗逢健,陈宗懋. 2019

[15]山东潍坊地区黄瓜中623种农药及代谢物残留的快速筛查及风险评估. 李晓慧,王琦,张琛,岳宁,李敏洁,邵勇,邵华,郑鹭飞,王静,金芬. 2022

[16]火龙果果实甜菜苷类色素组成与分布. 阳辛凤,王盼,郭晓杰,杨磊,李琼. 2021

[17]液相色谱-串联质谱法应用于动物源性食品中多族药物筛查确证的研究进展. 尹志强,宋月,柴婷婷,王昕璐,贾琪,杨曙明,邱静. 2017

[18]免疫分析技术在农产品农兽药残留检测中的应用. 赵晓丽,谢书越,陈炎,万凯. 2020

[19]雌激素质谱筛查分析方法的研究. 史艳艳,刘庆生,范志影,李俊,秦玉昌. 2015

[20]注水肉快速筛查敏感指标探究. 刘丽华,张松山,张禧庆,孙宝忠,雷元华,修建胜,谢鹏. 2019

作者其他论文 更多>>

微信小程序