通过体外分子进化技术获得耐高温β-葡萄糖苷酸酶的研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 熊爱生

作者： 熊爱生;姚泉洪;彭日荷;陈建民;李贤;范惠琴

作者机构：

关键词： β-葡萄糖苷酸酶;体外分子进化;基因重排;耐高温

期刊名称： 遗传学报

ISSN： 0379-4172

年卷期： 2002 年 29 卷 11 期

页码： 1034-1040

收录情况： SCI ; 北大核心 ; CSCD

摘要： 采用高保真聚合酶从质粒pBI12 1中扩增出 1.8kb的专一条带 ,克隆入pBluescriptSK载体 ,测序结果显示与报道一致。该克隆GUS基因被用作对照 ,再以此为模板 ,通过DNA重排技术 ,经DNaseⅠ降解 ,PrimerlessPCR ,PrimerPCR重新得到大量的突变GUS基因。这些突变的GUS基因构建入原核表达载体pG2 5 1中 ,电击转化大肠杆菌菌株DH5α ,构建GUS基因突变体库 ,经过 3轮的重排、筛选得到 80℃处理 30分钟仍显示较高活性的耐高温GUS基因GUS3 3,基因测序显示 ,GUS3 3与GUS基因之间的同源性为 99.2 % ,核苷酸序列推导的氨基酸序列显示 ,11个氨基酸发生了突变 ,80 %的突变集中在蛋白的C端。Tm值GUS3 3为 80℃ ,GUS ck为 5 5℃ ,提高了 2 5℃ ,GUS3 3β -葡萄糖苷酸酶热稳定性有了很大的提高 ,GUS3 3酶的最适温度明显提高。

分类号： Q78

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