用毕赤酵母表达理氏木霉的β-葡萄糖苷酶基因

文献类型： 中文期刊

第一作者： 林海鹏

作者： 林海鹏;沈锦城;尹慧祥;张泽华;张爱联

作者机构：

关键词： β-葡萄糖苷酶;毕赤酵母;套叠PCR;基因表达;酶活力

期刊名称： 生物技术

ISSN： 1004-311X

年卷期： 2012 年 22 卷 03 期

页码： 31-33

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的:为提高β-葡萄糖苷酶的产量,用毕赤酵母取代理氏木霉用于生产,以弥补理氏木霉在大规模生产中的缺陷。方法:用套叠PCR法从理氏木霉基因组中扩增β-葡萄糖苷酶基因(bglⅠ)。用T4DNA连接酶和限制性DNA内酶将bglⅠ重组于P.pastoris表达载体pPIC9K的多克隆位点,获得含bglⅠ的重组表达载体pPIC9K-bglⅠ。通过电转法将其pPIC9K-bglⅠ载体转化于P.pastoris基因组,筛选高G418抗性以及高表达bglⅠ酶的重组子作为工程菌。结果:用BMGY-BMMY培养基体系,在摇瓶中发酵48 h,表达BglⅠ30 mg/L,在P.pastoris中表达的BglⅠ能水解对硝基苯-β-D-葡萄糖苷具有β-葡萄糖苷酶活性。其酶活力为56 U/L发酵液。结论:通过这种方法,可以成功地用毕赤酵母表达理氏木霉的β-葡萄糖苷酶基因。

分类号： Q786

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