基于CRISPR/Cas9的蛹虫草无抗性标记转化技术的构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李波

作者： 李波;邹根;周思池;尹昕;杨占山;鲍大鹏;李晓玲;汪滢

作者机构：

关键词： CRISPR/Cas9;蛹虫草;无抗性标记;ura5;营养缺陷型标记

期刊名称： 菌物学报

ISSN： 1672-6472

年卷期： 2022 年 007 期

页码： 1044-1054

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 传统的真菌遗传改造方法需要抗性标记，但目前可使用的抗性标记基因非常有限，导致蛹虫草遗传改造面临着抗性基因数量不足的问题，且尚未能实现多个目的基因的连续敲入或敲除，因此在蛹虫草中建立高效的无抗性标记转化技术显得尤为重要。本研究利用CRISPR/Cas9技术对蛹虫草的Cmura5基因进行编辑，通过内源5S-1、5S-2和U6启动子对gRNA进行转录，结果表明使用U6启动子对Cmura5基因的编辑效率达到了100%。在尿嘧啶缺陷型菌株Cmura5–中，回补野生型Cmura5基因可实现正向选择，即野生型菌株可以在基础培养基上生长。利用设计的同源臂对Cmura5基因进行回收，可以实现反向选择，即野生型在含有5-氟乳清酸培养基中生长受到抑制。以尿嘧啶缺陷型Cmura5–为出发菌株，利用无抗性标记转化技术，导入一个重组质粒效率为75%；连续导入2个重组质粒效率为80%；连续导入3个重组质粒效率为100%；连续导入4个重组质粒效率为50%，平均转化效率为75.7%，每一轮的标记回收率均在100%，实现了4个外源基因在蛹虫草中同时表达。

分类号： S646

  • 相关文献

[1]蛹虫草多糖对果蝇寿命及抗氧化活性的影响. 张明,何超,邵颖,刘辉,高兆建. 2016

[2]氮离子注入蛹虫草选育高效富硒菌株的研究. 王陶,李文,陈宏伟,李同祥,赵天兰. 2014

[3]富锌蛹虫草菌丝体不同溶剂浸提物的体外抗氧化能力. 朱蕴兰,陈宏伟,方尚玲. 2016

[4]高温和强光对蛹虫草子实体成分和酪氨酸酶抑制活性的影响. 邵颖,陈尚龙,郑义,陈宏伟,巫永华. 2016

[5]不同分子量段蛹虫草多糖的超滤分离及其对巨噬细胞释放NO的影响. 朱丽娜,周帅,刘艳芳,杨焱,王世平,王兆龙,唐庆九. 2011

[6]蛹虫草及其培养基中主要核苷类成分的分析比较. 刘艳芳,唐庆九,杨焱,张劲松,郝瑞霞,唐传红,魏东芝,史国平. 2010

[7]氯化锂诱变蛹虫草菌株液体发酵富集微量元素锌. 王陶,储渊明,陈宏伟,李文,高明侠,董玉玮,李同祥,张传丽. 2017

[8]蛹虫草子实体中类胡萝卜素的提取及抗氧化活性. 邵颖,陈安徽,刘辉,胡模,赵士琛. 2016

[9]人工培育条件对蚕蛹虫草主要活性成分含量的影响. 顾寅钰,施新琴,李化秀,乔鹏,郭光. 2017

[10]蛹虫草子实体中抗氧化活性化合物的分离纯化. 邵颖,张传丽,周扬. 2015

[11]蛹虫草子实体中β-胡萝卜素的稳定性及抑菌活性. 邵颖,刘辉,赵士琛. 2016

[12]蛹虫草孢子粉活性成分分析. 温鲁,张平,唐玉玲. 2005

[13]蛹虫草菌丝固体法培养初探. 徐冲,钟丽娟,赵新海,张庆华,陈杰. 2010

[14]真菌多糖激发子的筛选及对蛹虫草多糖激发条件的优化. 马晓宁,贾俊强,滕国琴,马如箭,于洁. 2012

[15]冬虫夏草与蛹虫草原生质体融合初探. 郭成金,赵润,朱文碧. 2010

[16]虫草属EST-SSR标记系统的建立研究. 管俊娇,虞泓,解云峰,左世梅,马荣锋,曾文波. 2011

[17]基因组DNA去甲基化法改良蛹虫草菌株高产虫草素及性状稳定性评价. 朱巍巍,李莉,陈飞,李杨,王艳华,包永明. 2016

[18]蛹虫草菌株的交配型鉴定及其部分栽培特征研究. 刘敏祥,何华奇,茅文俊,鲍大鹏. 2017

[19]蛹虫草菌丝体醇提物对氢化可的松致小鼠肝损伤的保护作用. 施明珠,李有贵,钟石,樊美珍,计东风. 2009

[20]蛹虫草抗肿瘤和免疫活性部位的体外筛选. 杜秀菊,张劲松,贾薇,唐庆九,刘艳芳,杜秀云. 2011

作者其他论文 更多>>

微信小程序