L929细胞无血清悬浮驯化及其在流产衣原体灭活疫苗中的应用研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘东慧

作者： 刘东慧;李兆才;梁林;谭书敏;闫海全;白天俊;王淑芳;闫文军;周继章

作者机构：

关键词： L929贴壁细胞;悬浮培养驯化;流产衣原体;灭活疫苗;免疫评价

期刊名称： 中国兽药杂志

ISSN： 1002-1280

年卷期： 2024 年 58 卷 004 期

页码： 1-13

摘要： 为通过悬浮细胞培养方法规模化生产流产衣原体抗原,采用逐步降血清悬浮驯化法使贴壁L929 细胞逐步适应悬浮培养环境,最终获得了一株可无血清悬浮培养的L929 细胞株.将流产衣原体接种于L929 悬浮细胞上,研究不同的促感染试剂以提高收菌量,并选择出最佳的培养方法制备流产衣原体灭活疫苗.以25 μL、50 μL、100 μL的剂量免疫Balb/c小鼠,攻毒后检测其免疫保护效果.结果显示,当该L929 悬浮细胞初始接种密度为5×105/mL时,培养72h后细胞浓度可达到约7×106/mL,细胞活力在95%以上;在细胞密度为6×106/mL,接菌量为5.5×104 IFU/mL,加入脂质体2000 的量为1.7 μL/mL、放线菌酮浓度为0.4 μg/mL时,菌量增殖倍数最大,48h内约扩增了52 倍.经流产衣原体悬浮培养细胞灭活疫苗免疫后,小鼠产生的抗体水平随免疫剂量的增加而提升;接种50 μL、100 μL疫苗组小鼠的脾淋巴细胞增殖水平、IFN-γ、IL-2 的含量远高于接种25 μL疫苗和注射PBS组的小鼠;对免疫后的小鼠进行攻毒,接种疫苗组小鼠的脾脏、十二指肠、子宫中的流产衣原体基因组含量远低于未接种疫苗组小鼠.注射PBS组及接种25 μL疫苗组的小鼠子宫出现了不同程度的坏死及炎症,而其余两组小鼠的子宫无异常变化.结果表明,本试验成功驯化出1 株L929 悬浮培养细胞株,并且通过悬浮培养工艺制备的流产衣原体灭活疫苗免疫效果良好,接种50 μL、100 μL该灭活疫苗可以有效抑制流产衣原体的感染,该L929 细胞全悬浮培养株的成功驯化为疫苗规模化生产提供了技术支持.

分类号： S859.797

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