鸡髓样分化因子88的原核表达及单克隆抗体制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 赵兴旺

作者： 赵兴旺;刘冉冉;郑麦青;文杰;陈继兰;赵桂苹

作者机构：

关键词： 鸡髓样分化因子88;原核表达;单克隆抗体

期刊名称： 生物技术通讯

ISSN： 1009-0002

年卷期： 2011 年 22 卷 06 期

页码： 850-854

摘要： 目的:克隆、表达、纯化鸡髓样分化因子88(MyD88),制备其单克隆抗体。方法:从脾脏cDNA中扩增857bp的MyD88基因片段,插入pMAL-c5X表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)获得表达菌株,IPTG诱导表达,用SDS-PAGE分析MBP(麦芽糖结合蛋白)-MyD88重组融合蛋白的表达,切胶纯化目的蛋白;免疫BALB/c小鼠,制备针对MyD88的单克隆抗体,Western印迹检测抗体特异性,制备腹水并进行抗体亚型鉴定和效价测定。结果:构建了鸡MyD88原核表达载体pMAL-MyD88,并在大肠杆菌中获得高表达,目的蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在;建立了3株抗鸡MyD88单克隆抗体细胞株,制备了腹水,亚型分别为IgG1、IgG1和IgG2a,轻链均为κ,腹水抗体的效价均为1∶2×105。结论:在原核表达系统中表达、纯化了重组鸡MyD88,制备了针对鸡MyD88的单克隆抗体,为后续的MyD88定量和功能研究奠定了基础。

分类号： S852.43`Q78

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