中国斗鸡DJ-1基因克隆与原核、真核表达研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 冯宝刚

作者： 冯宝刚;朱超;王会;武珅;娜日苏;卢晟盛;关伟军

作者机构：

关键词： 中国斗鸡;DJ-1;克隆;真核表达;原核表达

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2010 年 37 卷 05 期

页码： 72-76

收录情况： 北大核心

摘要： 本研究以中国斗鸡λ噬菌体cDNA文库为模板,克隆了DJ-1基因,并构建了pGEX-4T-1-DJ-1原核表达载体和pEGFP-N3-DJ-1真核表达载体,前者用来研究DJ-1蛋白在大肠杆菌表达系统中的优化表达;后者用来转染成纤维细胞系,研究DJ-1蛋白的亚细胞定位和建立转DJ-1基因的细胞模型。试验成功克隆了DJ-1基因的CDS区,并将其定向插入到pGEX-4T-1原核表达载体和pEGFP-N3真核表达载体中。IPTG浓度梯度诱导原核表达结果显示,在0.8mmol/L时DJ-1蛋白表达量最高;时间梯度结果显示,在8h时DJ-1蛋白表达量最高;真核表达载体转染脂尾羊成纤维细胞后48h阳性率最高,DJ-1蛋白在细胞核和胞质中均有表达,但胞质中居多。上述结果表明,本试验已经建立了稳定的DJ-1蛋白的真核、原核优化的表达系统,为进一步研究DJ-1基因的功能奠定了基础。

分类号： S865`Q78

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