文献类型： 中文期刊
第一作者： 刘雪婷
作者： 刘雪婷;王召阳;鑫婷;郭晓宇;姜一曈;崔帅;于海男;朱鸿飞;贾红
作者机构： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
关键词： 非洲猪瘟病毒（ASFV）;B438L基因;p49重组蛋白;原核表达;多克隆抗体
期刊名称： 中国畜牧兽医
ISSN： 1671-7236
年卷期： 2021 年 003 期
页码： 991-1000
收录情况： 北大核心
摘要： 本研究旨在通过构建非洲猪瘟病毒（ASFV）B438L基因原核表达系统表达p49重组蛋白,并制备抗p49蛋白的多克隆抗体。根据ASFV Georgia 2007/1（GenBank登录号:FR682468.1）公布的基因序列合成B438L基因,并将其插入pET-28a（+）载体,构建pET-28a-B438L重组质粒,转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞,在16℃经1 mmol/L IPTG诱导12 h,通过SDS-PAGE对重组蛋白表达形式进行分析;利用串联质谱技术鉴定重组蛋白是否正确表达;将纯化的p49重组蛋白免疫小鼠制备鼠源抗p49多克隆抗体,利用间接ELISA方法测定该多克隆抗体的效价,并以间接免疫荧光试验及Western blotting检测该多克隆抗体的特异性。结果显示,试验成功构建了pET-28a-B438L重组质粒,转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞后经诱导表达获得了p49重组蛋白,重组蛋白主要以包涵体形式表达,大小约为60 ku;串联质谱技术进一步证实该蛋白为p49。间接ELISA检测制备的鼠源抗p49多克隆抗体效价达1∶64 000,间接免疫荧光试验及Western blotting结果表明制备的鼠源抗p49多克隆抗体能特异性识别p49蛋白。以上结果表明,该原核表达的ASFV p49重组蛋白具有良好的免疫原性,利用表达的p49重组蛋白制备的多克隆抗体具有较高的抗体效价和特异性,为进一步研究ASFV p49蛋白的结构与功能、研制相关的ASFV诊断试剂及疫苗提供了生物材料。
分类号： S852.651
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