基于KASP平台的转基因玉米高通量特异性检测方法

文献类型： 中文期刊

第一作者： 朱少喜

作者： 朱少喜;金肇阳;葛建镕;王蕊;王凤格;路运才

作者机构：

关键词： 转基因玉米;回交转育;前景选择;KASP平台;高通量

期刊名称： 生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2023 年 39 卷 006 期

页码： 133-140

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了促进转基因玉米产业化发展,加快优良性状转化体与骨干自交系的转育工作,适用于回交群体的高通量前景选择方法亟待开发.本研究以转基因玉米DBN9936 为材料,根据其外源插入片段及其侧翼序列,采用primer5 软件设计了 6 对特异性引物,与内标准基因zSSⅡb引物进行组合用于评估,获得最优引物组合后,进一步开展特异性验证、检出限测试和多样品验证.结果显示,最优引物组合为DBN9936-LB1*zSSⅡb-k1;10 份DBN9936 BC1 代种子的 KASP基因分型结果与琼脂糖凝胶电泳结果完全一致;10 份转化体DBN9858、DBN9501、C0010.1.3、C0010.3.1、C0010.3.7、C0030.2.5、BT11、GA21、MIR162 和 2A-7 的转基因玉米样品在双平台上检测结果均表现为阴性;转基因玉米DBN9936 的检出限为 10%;48 份不同DBN9936 杂交种材料的KASP基因分型结果均表现为阳性.综上,本研究方法可用于转基因玉米DBN9936 回交转育过程中的前景选择,且样品通量高,为其他农作物在转基因育种过程中的目标基因检测提供了技术参考.

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