人/猴免疫缺陷病毒SHIV衣壳蛋白p27的表达纯化及活性鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 华秋东

作者： 华秋东;姜成刚;王海;相文华;周建华

作者机构：

关键词： SHIV;p27;原核表达;大肠杆菌

期刊名称： 东北农业大学学报

ISSN： 1005-9369

年卷期： 2008 年 39 卷 11 期

页码： 57-61

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 利用PCR技术从质粒SHIV89.6P中扩增p27gag基因,并克隆入pMD18-T载体,测序鉴定;将p27gag基因插入表达载体pET32aT7启动子下游,构成重组质粒pET32a-p27并使其在大肠杆菌BL21中高效表达,最后利用固定化金属离子(Ni2+)配体亲和层析技术从表达蛋白中纯化目的蛋白,Western Blot检测活性。结果显示,融合蛋白p27经SDS-PAGE电泳观察可见45ku的明显条带,与预期分子质量大小一致且多以可溶形式表达,目的蛋白占菌体总蛋白的36.8%;经镍柱纯化,获得目的蛋白p27纯度可达98%;经Western Blot试验检测,证明此融合蛋白p27能与SHIV阳性血清发生特异性反应,具有较好的抗原活性。该研究为进一步开发早期诊断试剂盒和基因工程疫苗奠定了初步基础。

分类号： Q939.4

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