番木瓜胚性细胞悬浮系高效遗传转化体系的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 杨敏

作者： 杨敏;周陈平;李庆萌;邝瑞彬;吴夏明;魏岳荣

作者机构：

关键词： 番木瓜;胚性悬浮系;根癌农杆菌;遗传转化;共培养

期刊名称： 果树学报

ISSN： 1009-9980

年卷期： 2023 年 010 期

页码： 2089-2097

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】建立番木瓜高效遗传转化体系，为番木瓜基因功能研究和重要农艺性状改良提供新的技术支撑。【方法】以紫晖番木瓜胚性细胞悬浮系（embryogenic cell suspensions,ECS）为遗传转化受体，利用植物表达载体pCAMBIA1301和农杆菌介导法进行遗传转化，对抗生素浓度筛选、侵染时间、继代培养、抗性胚的诱导与萌发以及植株再生整个过程进行探索，最后获得抗性再生植株。【结果】通过设置不同浓度的头孢霉素和潮霉素处理，观察ECS细胞状态，筛选、确定头孢霉素和潮霉素最适处理质量浓度分别为200 mg·L-1和5 mg·L-1。工程菌和ECS共培养侵染2 d后转到含有头孢霉素和潮霉素的液体筛选培养基上进行继代培养，继代周期为14 d。经GUS染色验证，表明继代3次后的ECS几乎全部为转化细胞。将以上ECS转移到液体胚诱导培养基中进行培养，2个月后可获得大量球形体细胞胚，且GUS组织染色为蓝色。将球形体细胞胚转到半固体成熟培养基上培养，2个月后可获得成熟子叶期体细胞胚。子叶期体细胞胚在萌发培养基上光培养30 d后，可获得再生芽。任意选取再生芽进行GUS染色，均可染成蓝色。抗性再生芽经促根培养可成功获得再生植株。利用PCR检测抗性再生植株，可以确定GUS基因已经整合到番木瓜基因组中。【结论】成功建立了一种以番木瓜ECS为转化受体的农杆菌介导的高效遗传转化体系。在该技术体系中，经农杆菌侵染后的ECS继代筛选3次后，几乎全部为转化细胞，这些转化细胞经体胚诱导、成熟、萌发和生根过程可成功获得再生植株，抗性体胚得胚率为43.65%，抗性体胚萌发率为73.26%，植株再生率为80.55%，大大提高了番木瓜遗传转化效率。该体系为番木瓜基因功能研究和分子育种提供了新的途径。

分类号： S667.9

  • 相关文献

[1]提高农杆菌介导法将PinII抗虫基因导入滇型水稻的转化效率. 曾黎琼,丁玉梅,段玉云,董广,字映生,黄兴奇,程在全. 2004

[2]共培养环境对玉米遗传转化的影响. 王宏伟,梁业红,史振声,张世煌. 2011

[3]用农杆菌将Bt基因导入水稻愈伤组织的研究. 贝丽霞,王守德,史芝文,徐仲,郭三堆. 2000

[4]外源类甜蛋白基因在马铃薯中的表达. 岳东霞,金红,周良炎,S.Muthukrishnan. 2000

[5]根癌土壤杆菌介导棒形青霉的遗传转化. 孙成龙,刘永翔,任锡毅,王玉臣,刘作易. 2015

[6]根癌农杆菌介导谢瓦氏曲霉间型变种的遗传转化. 王海,谭玉梅,刘永翔,王阶平,刘作易. 2012

[7]过敏反应促进蛋白基因hrap转马铃薯的研究. 黄先群,蒋敏华,陈坚,朱振宇,李丽,林忠平. 2010

[8]昆虫病原真菌遗传改良研究进展. 张蕾,宋婷婷. 2017

[9]转hrap基因马铃薯获得晚疫病抗性研究. 黄先群,蒋敏华,陈坚,朱振宇,李丽,林忠平. 2011

[10]农杆菌介导籼稻优良恢复系bar基因的遗传转化研究. 饶志明,黄英金,肖晗,刘宜柏,孙宗修. 2003

[11]农杆菌介导籼稻Xa21基因的转化及其遗传研究. 饶志明,黄英金,肖晗,潘晓云,廖军铖,刘宜柏,孙宗修. 2003

[12]农杆菌介导的菜心遗传转化体系的建立. 张国裕,王岩,程智慧,王晓武. 2006

[13]根癌农杆菌介导AtNHX1基因转化紫花苜蓿的研究. 王强龙,王锁民,张金林,包爱科,陈托兄,楼洁琼,陆妮. 2006

[14]过表达FaSAMDC基因提高黑麦草属植物的抗旱性和耐热性. 曾庆飞,韦鑫,蔡一鸣,舒健虹,吴佳海,王小利. 2017

[15]根癌农杆菌介导的哈茨木霉菌遗传转化的研究. 蒋细良,田云龙,郭萍,朱昌雄. 2008

[16]农杆菌介导的大豆成熟胚芽尖遗传转化体系的优化. 杨海英,朱丹华,胡小丽,杨清华,袁凤杰,董德坤. 2011

[17]高效抗虫基因PinⅡ转化水稻的研究. 丁玉梅,曾黎琼,程在全,黄兴奇. 2003

[18]一种马铃薯高效无标记转基因技术的建立. 白云凤,张维锋,白冬梅,王国英,王茅雁. 2007

[19]影响根癌农杆菌介导的高效水稻遗传转化的相关因素分析. 黄红梅,杨永智,张治国,宛淑艳,郭蔼光,吴金霞,路铁刚. 2004

[20]根癌农杆菌介导遗传转化稻曲病菌. 张震,杜新法,柴荣耀,毛雪琴,邱海萍,王艳丽,王教瑜,孙国昌. 2006

作者其他论文 更多>>

微信小程序