同源重组法制备蹄疫病毒多基因重组腺病毒

文献类型： 中文期刊

第一作者： 卢曾军

作者： 卢曾军;曹轶梅;包惠芳;刘在新;赵启祖;陈应理;常惠芸;谢庆阁

作者机构：

关键词： 口蹄疫病毒

期刊名称： 中国病毒学

ISSN： 1003-5125

年卷期： 2004 年 19 卷 2 期

页码： 125-128

收录情况： CSCD

摘要： 通过细菌内同源重组的方法成功构建了含有O型口蹄疫病毒P1-2A和3C蛋白酶基因和3D基因的重组腺病毒表达载体。首先将P1-2A、3C和3D基因亚克隆连接到穿梭质粒pShuttle-CMV上，再将重组穿梭质粒用PmeI线性化后电转化携带有腺病毒骨架载体pAdeasy-l的大肠杆菌BJ5183感受态菌，经细菌内同源重组产生 pAdcmv-p12x3c和pAdcmv-p12x3cd重组腺病毒质粒，经序列测定证实目的基因已正确的插入到腺病毒骨架载体中。重组腺病毒质粒经PacI线性化后转染HEK293细胞，转染1w内细胞出现典型病变。取转染细胞裂解液上清连续传代至第4代时，细胞 24～48h内即痫变完全，收取接毒后24h细胞进行PCR和RT-PCR检测，表明目的基因已整合到腺病毒基因组内，且在mRNA水平上有表达。取第4、6、8和10代病毒，用蛋白酶K处理后可扩增出目的基因，证明此重组病毒可稳定存在。本研究为FMDV腺病毒活载体疫苗的研究奠定了基础。

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