基于N基因的RT-LAMP技术检测PEDV、TGEV、PDCoV三种猪腹泻冠状病毒的研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 邓可辉

作者： 邓可辉;陈志飞;俞婷;王志林;王修武;郭智轩;李松倍;魏文康;贺东生

作者机构：

关键词： 猪;冠状病毒;反转录环介导等温扩增;检测方法

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2025 年 33 卷 002 期

页码： 70-79

摘要： 本研究成功建立了检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪丁型冠状病毒(PDCoV)3种猪冠状病毒的反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP)，为现场快速诊断提供技术支持。根据GenBank公布的PEDV、TGEV、PDCoV的N基因保守序列作为靶序列设计了3套LAMP检测引物，并通过反应条件优化、敏感性试验、特异性试验以及临床样品检测，分别建立了3种快捷、敏感的猪冠状病毒RT-LAMP检测方法。结果显示：所建立的PEDV、TGEV、PDCoV 3种冠状病毒RT-LAMP检测方法的最佳反应温度分别为65 ℃、63 ℃、63 ℃，3种检测方法均可在45 min左右完成恒温扩增，扩增出特异性阶梯状条带，且不依赖于PCR仪等昂贵设备，仅需普通恒温装置即可反应。所建立的检测方法对PEDV、TGEV、PDCoV分别可以达到的检测下限为20、23、10拷贝/μL，敏感性较好；所建立的3种检测方法分别只检测出PEDV、TGEV、PDCoV，且与常见的猪源性病毒均无交叉反应，特异性好。用所建立的3种RT-LAMP检测方法对45份猪腹泻病料进行检测，PEDV、TGEV、PDCoV阳性率分别为33.33%(15/45)、22.22%(10/45)、13.33%(6/45)，均比常规RT-PCR检测阳性率高。与常规RT-PCR相比较，本研究建立的方法操作简便快速、经济，且检测设备门槛低，更适用于基层临床检测。

分类号： S858.28

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