非洲猪瘟病毒EP153R蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王召阳

作者： 王召阳;林伟东;刘雪婷;蒋亚君;鑫婷;侯绍华;郭晓宇;朱鸿飞;贾红

作者机构：

关键词： 非洲猪瘟病毒(ASFV);EP153R基因;液相色谱;原核表达;多克隆抗体

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2020 年 004 期

页码： 1163-1171

收录情况： 北大核心

摘要： 试验旨在构建非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)EP153R基因原核表达系统,表达EP153R重组蛋白(rEP153R),并制备抗rEP153R的多克隆抗体.根据ASFV Georgia 2007/1的EP153R基因序列(GenBank登录号:FR682468.1)合成EP153R基因序列,并将其插入pET-28a载体,构建pET-28a-EP153R重组质粒,经双酶切和测序鉴定后,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,分别在16和37℃条件下经IPTG诱导12 h进行最适诱导温度筛选.在最适温度下进行重组蛋白的表达,并利用SDS-PAGE、Western blotting进行初步鉴定.切取SDS-PAGE蛋白胶25 ku处条带,利用液相色谱-质谱联用技术鉴定重组蛋白是否正确表达.用纯化的rEP153R免疫小鼠,制备抗rEP153R的多克隆抗体,通过间接ELISA检测其抗体效价,Western blotting鉴定抗体特异性.结果显示,重组菌在16℃表达量较高,并以包涵体形式表达,产物在25 ku处出现明显的条带,与预期蛋白大小相符,表明rEP153R成功表达.液相色谱-质谱联用技术鉴定结果显示,匹配到YIGLINK、NESVLLR和KYIGLINK 3个rEP153R的特异性肽段,证实该蛋白为rEP153R.间接ELISA检测多克隆抗体效价为1∶128 000;Western blotting结果显示,制备的抗体具有较好的特异性.以上结果表明本研究成功表达了rEP153R,并制备了其特异性抗体,为进一步研究该蛋白生物学功能、非洲猪瘟活载体疫苗鉴定等提供了技术支持和材料.

分类号： S852.651

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