牛呼吸道主要病原体多重PCR检测方法的建立与应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 沈思思

作者： 沈思思;江波涛;冯万宇;秦平伟;兰世捷;苗艳;李丹;张蕾;刘雪松;张国华;王欢;李青莹;薛沾枚;王岩;南景东;刘文;陈亮

作者机构：

关键词： 牛;呼吸道疾病;多重聚合酶链反应

期刊名称： 动物医学进展

ISSN： 1007-5038

年卷期： 2025 年 46 卷 002 期

页码： 61-66

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立可同时检测牛腺病毒3型(BAdV-3)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)、牛支原体(MB)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的五重PCR方法，基于病原体的保守序列设计5对特异性引物。对退火温度和引物浓度筛选，验证方法的特异性、敏感性和重复性，建立可同时检测BAdV-3、BRSV、MB、IBRV和BVDV的五重PCR方法，并初步应用于临床。结果表明，该方法特异性强，仅对BAdV-3、BRSV、MB、IBRV和BVDV有特异性扩增，最适退火温度54.5℃,最适引物浓度0.6μmol/L;对5种病原体最低检出限分别为BAdV-3 1.67×10～4拷贝/μL、BRSV 1.58×10～4拷贝/μL、MB 1.75×10～3拷贝/μL、IBRV 1.44×10～3拷贝/μL、BVDV 1.25×10～4拷贝/μL。用该五重PCR和单项PCR分别检测268份临床样本，显示五重PCR阳性检出率分别为BAdV-3 9.33%(25/268)、BRSV 7.09%(19/268)、MB 28.73%(77/268)、IBRV 11.94%(32/268)、BVDV 25.75%(69/268)。混合感染主要以MB和BVDV为主，感染率为12.69%(34/268)。五重PCR扩增结果与单项PCR扩增结果符合率为93.36%,表明建立的五重PCR方法为临床快速检测及流行病学调查提供了技术支持。

分类号： S858.23

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