牛结节性皮肤病病毒LAMP快检方法的建立与应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 袁向芬

作者： 袁向芬;许晓琳;孔玉方;吕继洲;王慧煜;王彩霞;张舟;邓俊花;景志忠;吴绍强

作者机构：

关键词： 牛结节性皮肤病病毒;环介导等温扩增技术(LAMP);快检技术

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2023 年 53 卷 011 期

页码： 1355-1362

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究旨在建立一种特异性检测牛结节性皮肤病病毒(LSDV)的LAMP快检方法,以用于该病临床早期诊断与监测.笔者根据LSDV的特异性基因序列,设计了数十套LAMP引物,经过筛选最终确定1套反应效率最高的引物,其位于LSDV095基因序列内.以实验室保存的PUC57-LSDV质粒作为阳性质控进行方法的优化与验证,基于不同的检测需求,分别建立了实时浊度LAMP检测方法、实时荧光LAMP检测方法及荧光可视化LAMP检测方法.优化后的3种LSDVLAMP方法灵敏度均可达20 copies/反应的靶基因,与WOAH推荐的实时荧光PCR方法(5 copies/反应)相近;特异性良好,与山羊痘病毒(GTPV)、绵羊痘病毒(SPPV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、赤羽病病毒(AKV)、蓝舌病病毒(BTV)及口蹄疫病毒(FMDV)均无交叉反应.其中,实时浊度法操作程序简单,实时荧光法反应快速(25 min内完成检测),荧光可视化法不依赖专用仪器及中心实验室.将所建方法应用于临床样本的检测,显示这3种方法均可特异性检测到LSDV,与实时荧光PCR方法检测结果一致性为100%,优于WOAH推荐的普通PCR方法.所建方法具有快速、特异、灵敏、操作简便且不依赖专用仪器等优点,可为LSDV的临床快速筛查提供技术支持.

分类号： S852.654

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