西番莲病毒可视化多重RT-LAMP检测技术的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 谢丽雪

作者： 谢丽雪;陈细红;张小艳;陈江姗;张立杰;高芳銮;沈建国;李韬

作者机构：

关键词： 西番莲;东亚西番莲病毒;夜来香花叶病毒;黄瓜花叶病毒;多重逆转录环介导等温核酸扩增;病毒检测

期刊名称： 病毒学报

ISSN： 1000-8721

年卷期： 2023 年 39 卷 006 期

页码： 1682-1692

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 东亚西番莲病毒(East Asian Passiflora virus,EAPV)、夜来香花叶病毒(Telosma mosaic virus,TeMV)和黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)是当前危害我国西番莲的主要病毒种类.为建立同时快速检测西番莲上EAPV、TeMV和CMV的可视化多重逆转录环介导等温核酸扩增(Multiplex reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,multiplex RT-LAMP)技术,本研究根据 GenBank 已报道的 EAPV、TeMV 和 CMV 外壳蛋白(Coat protein,CP)基因序列保守区域分别设计、筛选特异性引物,并通过反应体系和反应条件的优化,建立了可同时快速检测EAPV、TeMV和CMV的多重RT-LAMP技术,并进行了特异性、灵敏度测定及西番莲果园样品的检测.结果表明,建立的多重RT-LAMP方法特异性良好,可对EAPV、TeMV和CMV同时进行检测,而与西番莲上其他病毒及阴性对照无交叉反应;多重RT-LAMP的灵敏度最低可检测稀释至145×10-3ng/μL总RNA,与一步法RT-PCR方法的灵敏度相当;西番莲果园样品3种病毒的多重RT-LAMP检测结果与一步法RT-PCR检测结果一致.本研究建立的多重RT-LAMP方法操作简便、特异性强、灵敏度高,适用于基层实验室和现场对西番莲上EAPV、TeMV和CMV的快速初筛.

分类号： S41-30

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