黑曲霉β-甘露聚糖酶基因manA在PK15细胞中的分泌表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 邹娴

作者： 邹娴;张茂;许惠;林纯;贺晓燕;刘德武;蔡更元;吴珍芳

作者机构：

关键词： 黑曲霉;β-甘露聚糖酶;重叠延伸PCR;PK15细胞

期刊名称： 生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2011 年 0 卷 08 期

页码： 192-197

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 通过RT-PCR方法,从黑曲霉总RNA中克隆出β-甘露聚糖酶基因manA的成熟肽编码序列。将其与猪腮腺分泌蛋白(parotid secretory protein,PSP)基因的信号肽序列通过重叠延伸PCR方法得到拼接片段,并插入到真核表达载体pcD-NA6.0/HisTMA中,得到重组质粒pcDNA-PSmanA。重组质粒经过PCR、酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且读码框完全正确。在脂质体介导下将pcDNA-PSmanA转染猪肾(PK15)细胞进行分泌表达,通过RT-PCR方法证实其在PK15细胞中表达,并在细胞培养液中检测酶活性得到β-甘露聚糖酶基因酶活性为14.5 IU/mL。

分类号： Q78

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