基于重组E2蛋白的牛病毒性腹泻病毒间接ELISA抗体检测方法的建立与评价

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张宜宸

作者： 张宜宸;孙明军;邓昌顺;丁家波;徐宝梁;陈磊;全春兰;赵康;范学政;秦彤

作者机构：

关键词： 牛病毒性腹泻病毒(BVDV);E2蛋白;间接ELISA

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2024 年 51 卷 012 期

页码： 5459-5469

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [目的]通过真核系统表达牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)E2蛋白,以此为包被蛋白建立一种BVDV间接ELISA抗体检测方法,以解决中国BVDV抗体检测技术不足的问题.[方法]将BVDV E2基因克隆至真核表达载体pTT5,转染293F细胞,待50%细胞死亡后进行超声破碎,并使用Ni离子亲和层析的方法纯化重组E2(rE2)蛋白;以rE2蛋白作为包被抗原,通过对各反应条件进行优化后建立检测BVDV抗体的间接ELISA方法,进行敏感性、特异性、重复性评价,并与中和试验进行比对.用所建方法对不同省份的牛血清样本进行检测.[结果]采用293F细胞表达了rE2蛋白,经亲和层析方法纯化,rE2蛋白的纯度为99%,浓度为1.74 mg/mL;通过对各个反应条件优化,成功建立了BVDV间接ELISA抗体检测方法.该方法与商品化试剂盒的灵敏度一致,均可检出抗体效价临界血清(VN=1);具有良好的特异性,与传染性牛鼻气管炎病毒(IBRV)、牛副流感病毒-3(BPIV-3)、牛呼吸道合胞病毒(BRSV)和牛疱疹病毒-1(BHV-1)抗体阳性血清均无交叉反应;板内和板间重复性试验的变异系数均在5%以内,证明该方法重复性较好;与血清中和试验的符合率为97.5%.临床样本检测结果显示,共检测出364份阳性血清和64份阴性血清.[结论]基于真核表达的rE2蛋白所建立的BVDV间接ELISA抗体检测方法具有良好的特异性和敏感性,可用于BVDV抗体检测,本研究结果为中国牛病毒性腹泻防控工作提供一种有效的技术手段.

分类号： S852.65+3

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