利用CRISPR/Cas9技术敲除斑马鱼ifi30基因

文献类型： 中文期刊

第一作者： 曹顶臣

作者： 曹顶臣;佟广香;吕伟华;孙志鹏;匡友谊;郑先虎;孙效文

作者机构：

关键词： 斑马鱼;ifi30;CRISPR/Cas9技术;敲除

期刊名称： 水产学杂志

ISSN： 1005-3832

年卷期： 2016 年 29 卷 06 期

页码： 26-30

摘要： 利用CRISPR/Cas9技术,在斑马鱼Danio rerio干扰素γ诱导蛋白30(ifi30)基因的第一个外显子处选取靶位点,用PCR法构建g RNA,并进行体外转录。将体外转录的sg RNA和Cas9m RNA显微注射到斑马鱼1细胞期的受精卵中,实现对靶基因ifi30的沉默。注射后24h检测发现,基因突变率在79%~95%之间,平均突变率为87.2%。为了获得稳定遗传的基因突变纯合系,将F_0代与野生型斑马鱼进行配组,获得了3种突变类型的F_1代,其突变率为30%。三种突变类型中突变1和突变2为移码突变,突变3删除了6个碱基,并未造成移码。突变1和突变2的F_1代杂合个体生长发育未见异常。将杂合F_1代自交,理论上将获得突变纯合个体,但仅在受精2h以内的胚胎中检测到了突变纯合个体,受精24h后的胚胎中,只有野生型和杂合型,未见突变纯合个体。推测ifi30基因的移码突变造成了干扰素γ诱导蛋白的缺失,导致胚胎死亡。

分类号： S917.4

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