水稻白叶枯病菌c-di-GMP受体Clpxoo关键结合功能位点的确定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李建宇

作者： 李波;陈华民;杨凤环;何晨阳;田芳

作者机构：

关键词： 水稻白叶枯病菌;c-di-GMP;信号受体蛋白;点突变体;结合作用

期刊名称： 生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2016 年 32 卷 12 期

页码： 124-129

收录情况： 北大核心

摘要： 旨在确定水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)c-di-GMP信号受体Clpxoo的关键功能位点。通过对Clpxoo蛋白氨基酸位点基因突变,表达载体构建、蛋白诱导表达及其Ni-NTA Resin亲和层析,进行了Clpxoo及其点突变蛋白的原核表达和产物纯化;通过等温滴定量热法(ITC),检测了Clpxoo及其点突变蛋白与c-di-GMP的结合作用。利用基因定点突变和桥接PCR方法,在优化的诱导表达和纯化条件下,成功地获得了Clpxoo点突变蛋白和与c-di-GMP不发生结合的Clpxoo点突变体。结果表明,Clpxoo蛋白第70位天冬氨酸和第99位谷氨酸是与c-di-GMP结合的关键功能位点。

分类号： S435.111.47

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