草鱼呼肠孤病毒HZ08株外衣壳蛋白VP4的节段克隆表达和免疫学分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 任鹏丽

作者： 任鹏丽;陈庭金;黄艳;曾伟伟;余新炳

作者机构：

关键词： GCRV HZ08;VP4;原核表达

期刊名称： 热带医学杂志

ISSN： 1672-3619

年卷期： 2016 年 02 期

页码： 140-144+271

摘要： 目的原核表达草鱼呼肠孤病毒(GCRV)HZ08株S6基因特定保守区域编码的外衣壳蛋白VP4并探究其免疫原性,为草鱼出血病(GCHD)防治提供新思路。方法将VP4基因特定保守区域克隆到原核表达质粒p ET-32a(+)中,诱导表达并用镍柱进行纯化,用纯化的目的蛋白免疫SD大鼠获取免疫血清;应用ELISA检测实验组(重组蛋白皮下免疫大鼠)和对照组(PBS免疫大鼠)血清Ig G抗体滴度及亚类的水平;应用间接免疫荧光实验(IFA)检测r VP4抗血清对病毒的识别情况。结果PCR、双酶切及DNA测序结果均表明p ET32a-VP4重组质粒构建成功;SDSPAGE结果表明目的基因在大肠杆菌BL21/DE3中获得高效表达,融合蛋白分子量约为43 k Da,且在37℃、1mmol/L IPTG条件下诱导表达效果最优;经亲和层析获得了高纯度蛋白;免疫大鼠6周后血清Ig G抗体滴度高达1∶819 200,Ig G1、Ig G2a水平差异无统计学意义(P>0.05);IFA结果显示抗血清组特异性荧光显著,而对照组未见荧光。结论 GCRV-HZ08 VP4具有良好的免疫原性,可诱导大鼠产生Th1/Th2混合型免疫反应,且r VP4抗血清可识别该病毒,为VP4作为疫苗候选分子提供了依据。

分类号： S941.4

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