绵羊ovPAG7间接竞争酶联适配体检测方法的建立与应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 卢春霞

作者： 卢春霞;刘长彬;万鹏程;郭延华;陈霞;李红敏;卢守亮

作者机构：

关键词： 妊娠相关糖蛋白;适配体;早期妊娠诊断;绵羊

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2022 年 38 卷 003 期

页码： 730-738

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立一种简便、经济、无创的应用于绵羊早期妊娠诊断的快速检测技术,以绵羊妊娠相关糖蛋白7(O-vine pregnancy-associated glycoproteins-7,ovPAG7)核酸适配体为分子识别探针,建立一种间接竞争酶联适配体(Indi-rect competitive enzyme-linked aptamer assay,ic-ELAA)检测ovPAG7的新方法,并对ovPAG7包被质量浓度、包被缓冲液、封闭条件、适配体浓度、链霉亲和素-辣根过氧化物酶(SA-HRP)稀释比例等检测条件进行优化,将建立的方法应用于人工授精后28 d的中国美利奴羊血清检测,检测结果与妊娠相关糖蛋白-酶联免疫吸附测定(PAG-ELISA)商业化试剂盒和B超检测法进行比较.结果显示,在ovPAG7包被质量浓度为2.0μg/ml、包被缓冲液为50 mmol/L碳酸盐缓冲液(pH 9.6)、1.0%牛血清蛋白质封闭2 h、适配体浓度为40 nmol/L、SA-HRP稀释比例为1:40000(体积比)、室温下竞争反应时间为40 min等优化条件下,ovPAG7在缓冲液体系和血清体系中质量浓度的线性范围均为0.1~50.0 ng/ml(R2>0.994),半数抑制质量浓度(IC50)分别为1.40 ng/ml和2.11 ng/ml,检测限分别为0.11 ng/ml和0.19 ng/ml.ovPAG7在空白样品中加标回收率为96.4%~106.8%,相对标准偏差小于6.0%.妊娠诊断结果显示,ic-ELAA法的诊断敏感性、特异性和准确率分别为96.0%、83.3%和91.2%,与B超检测结果一致性较高(Kappa值=0.810).

分类号： S826.3+5

  • 相关文献

[1]基于适配体-金属有机框架模拟酶比色检测牛妊娠相关糖蛋白9. 卢春霞,刘长彬,张振良,卢守亮,倪建宏,王超丽. 2025

[2]基于适配体-MOF模拟酶比色检测bPAG. 卢春霞,刘长彬,张振良,卢守亮,吴世嘉. 2024

[3]酶联适配体可视化检测牛妊娠相关糖蛋白9(bPAG9)及其在奶牛早孕检测中的应用. 卢春霞,刘长彬,周平,林祥群. 2021

[4]牛妊娠相关糖蛋白16(bPAG16)基因密码子优化及表达. 刘长彬,卢春霞,卢守亮,倪建宏. 2021

[5]羊妊娠相关糖蛋白5的制备及生物信息学分析. 卢春霞,刘长彬,倪建宏,傅祥伟,周平,卢守亮,万鹏程. 2023

[6]肉牛妊娠初期血、尿中孕酮、妊娠相关糖蛋白、早孕因子的变化. 金海,赵拴平,徐磊,贾玉立,贾玉堂. 2018

[7]家畜早期妊娠诊断的研究进展. 李雯乔,李发弟,王新基,乐祥鹏. 2023

[8]妊娠相关糖蛋白检测试剂盒在奶牛早期妊娠诊断上的应用. 薄小辉,魏玉广,赵学明,刘岩,郝海生,庞云渭,朱化彬. 2017

[9]直肠B超在湖北黑头山羊发情鉴定和早期妊娠诊断中的应用. 熊琪,张群,金晶,蒋齐仕,陈波,张年,陶虎,张凤,陈明新. 2020

[10]免疫学技术在奶牛妊娠检查中的应用. 李晓林,刘长彬. 2017

[11]牛妊娠相关糖蛋白6基因密码子优化及其在HEK293细胞中的表达. 刘长彬,卢春霞,石国庆,倪建宏,卢守亮. 2020

[12]牛乳孕酮的微滴平板酶免疫测定法. 黄夺先,侯继波,周元根,吴美珍,赵伟,姚连生,袁健康. 1988

[13]基于母体血浆胎盘源及胚胎源核酸分子的早期妊娠诊断及早期胎儿性别鉴定技术. 邢光东,夏银,茆骏,郭宁,王根林. 2009

[14]奶牛早期妊娠诊断技术研究进展. 左海洋,陈晓丽,蔡勇,郝海生,秦彤,赵学明,路永强,王栋. 2014

[15]用血清酸滴定法对梅花鹿、马鹿进行早期妊娠诊断的研究. 王雷,崔学哲,李一清,邢秀梅,杨福合. 2009

[16]奶牛早期妊娠诊断研究进展. 卜建华,雷静,李艳艳,脱征军,梁小军. 2015

[17]母牛早期妊娠诊断技术研究进展. 原开敏,时玉新,董智豪,赵羚均,许师源,吴开慧,王栋. 2023

[18]莱芜黑山羊同期发情及早期妊娠诊断技术研究. 王可,王晓达,常仲乐,李萌,靳青,刘昭华,朱荣生,谭秀文. 2023

[19]PAG ELISA早孕检测试剂盒对奶牛繁殖效率的影响. 李艳艳,卜建华,雷静,脱征军,温万. 2016

[20]用血清酸滴定法对梅花鹿、马鹿进行早期妊娠诊断的研究. 王雷,崔学哲,李一清,邢秀梅,杨福合. 2010

作者其他论文 更多>>

微信小程序