簇毛麦端体6VS的显微切割及其专化DNA序列的克隆和分析(英文)

文献类型： 中文期刊

第一作者： 孔凡晶

作者： 孔凡晶;陈孝;马有志;辛志勇;李连成;张增艳;林志姗

作者机构：

关键词： 染色体显微切割及微克隆;簇毛麦;原位杂交;端体异代换系;专化DNA序列;RFLP

期刊名称： Acta Botanica Sinica

ISSN： 0577-7496

年卷期： 2002 年 03 期

页码： 307-313

收录情况： SCI ; 北大核心

摘要： 从簇毛麦 (Haynaldiavillosa (L .)Schur.)组合CA92 11/RW15 (6D/ 6V异代换系 )幼胚培养SC2 后代中 ,用原位杂交方法鉴定出T2 40_6为 6VS端体异代换系。以此为材料 ,采用微细玻璃针切割法及“单管反应”技术体系 ,对 6VS进行切割分离及LA (Linkeradaptor)_PCR扩增。扩增带在 10 0～ 30 0 0bp之间 ,大部分集中在 6 0 0～ 15 0 0bp。利用3 2P标记的簇毛麦基因组为探针进行Southern杂交 ,证实扩增产物来源于簇毛麦。扩增产物纯化后 ,连接到pGEM_T载体上 ,构建了 6VSDNA质粒文库。对文库的分析表明 ,文库大约有 170 0 0个白色克隆 ;插入片段分布在 10 0～15 0 0bp ,平均 6 0 0bp。点杂交结果表明 ,37%克隆有中度到强烈的杂交信号 ,证明含有中度或高度重复序列 ;6 3%克隆有较弱的信号或没有信号 ,证明为单 /低拷贝序列克隆。从文库中获得 8个簇毛麦特异克隆 ,对其中两个克隆pHVMK2 2和pHVMK134进行了RFLP分析和序列分析 ,并利用该探针对小麦抗白粉病基因Pm2 1进行了检测。RFLP结果表明 ,两个克隆一个为低拷贝序列克隆 (pHVMK2 2 ) ,另一个为高度重复序列克隆 ,均为簇毛麦专化DNA序列。以pHVMK2 2为探针对抗、感病小麦 (TriticumaestivumL .)品系的Southern杂交发现抗病品系有一条 2kb的特征带 ,该探针可能作?

分类号： Q943

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