猪囊尾蚴AgB基因的克隆表达及其免疫学特性分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 郭爱疆

作者： 郭爱疆;才学鹏;海岗;窦永喜;贾万忠;骆学农;张少华;景志忠

作者机构：

关键词： 猪囊尾蚴AgB基因;原核表达;纯化

期刊名称： 免疫学杂志

ISSN： 1000-8861

年卷期： 2008 年 05 期

页码： 35-38

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的克隆猪囊尾蚴AgB基因并在大肠杆菌中表达,为研制猪囊尾蚴病诊断试剂和基因工程疫苗奠定基础。方法从猪囊尾蚴虫体中提取总RNA,利用反转录聚合酶链式反应及重叠延伸PCR法扩增AgB完整序列,并克隆到原核表达载体pGEX-4T-1,在大肠杆菌中诱导表达。通过SDS-PAGE、Western-blotting检测AgB的表达和免疫反应活性。通过对包涵体的洗涤、纯化及变复性研究,纯化目的蛋白。采用ELISA法检测纯化蛋白检出猪囊尾蚴阳性血清率和免疫小鼠血清中抗猪囊尾蚴抗体的水平。结果测序证实扩增出AgB基因序列并正确插入到原核表达载体。表达质粒在大肠杆菌BL21中高效表达。纯化的目的蛋白,具有良好的抗原性和免疫原性。结论成功扩增了全长AgB基因并得到了高效表达,纯化了具有免疫性的重组蛋白,为进一步开展AgB的诊断试剂和重组疫苗研究奠定了基础。

分类号： S852.7`S852.5

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