菊花5种病毒及类病毒多重RT-PCR检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张利英

作者： 张利英;王森;陈东亮;喻锌;姜宝龙;程钰涵;李彦慧;黄丛林

作者机构：

关键词： 菊花;病毒;类病毒;多重RT-PCR

期刊名称： 病毒学报

ISSN：

年卷期： 2023 年 004 期

页码： 1045-1052

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 菊花是世界最重要的园艺作物之一，兼具有茶用、药用、食用及观赏等多种经济价值。我国是栽培菊花的起源地，也是主要种植生产区。病毒病害是菊花生产过程中最主要病害，目前已知的菊花病毒及类病毒有20多种，对菊花产业危害巨大。建立快速、高效的检测方法是病害防控的必要条件。前期调查显示番茄斑萎病毒（Tomato spotted wilt orthotospovirus,TSWV）、番茄不孕病毒（Tomato aspermy virus,TAV）、菊花B病毒（Chrysanthemum virus B,CVB）、菊花矮化类病毒（Chrysanthemum stunt viroid,CSVd）和菊花褪绿斑驳类病毒（Chrysanthemum chlorotic mottle viroid,CChMVd）是北京地区菊花中主要病毒及类病毒种类。自NCBI数据库下载以上病毒/类病毒的基因序列，利用不同病毒保守区域，设计开发出特异性引物，建立了5种病毒/类病毒同时检测的多重RT-PCR体系；并对反应体系中引物对的含量配比、退火温度、模板含量等因子进行了优化。试验结果显示，TSWV、TAV、CVB、CChMVd、CSVd的引物对浓度分别为300 nmol/L、50 nmol/L、200 nmol/L、700 nmol/L、600 nmol/L，模板用量0.5 ng/μL，退火温度55.3℃时，可以同时扩增出片段大小为分别485 bp、376 bp、292 bp、220 bp、110 bp的目的条带，特异性良好，结果判读简单清晰。进一步的比较分析显示，其与单一病毒检测的RT-PCR体系的检测灵敏性相当。综上，本研究构建的多重RT-PCR体系可以高效、快速、灵敏的检测菊花中常见的5种病毒及类病毒，并且检测成本大幅降低，为病毒的快速、低成本检测提供了方法。

分类号： S436.8

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