传染性法氏囊病病毒VP↓3基因的克隆和鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 陈忠斌

作者： 陈忠斌;徐宜为;于康震;王艳华;袁世山;王秀丽;卢景良

作者机构：

关键词： 传染性法氏囊病病毒;VP↓2基因;克隆;RT-PCR

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 1997 年 17 卷 1 期

页码： 5

收录情况： CSCD

摘要： 以鸡胚成纤维细胞培养IBDV弱毒疫苗株D78,经蔗糖密度梯度离心纯化,电镜下见典型IBDV粒子。用SDS-蛋白酶K法提取病毒基因组,低熔点胶回收,琼脂糖凝胶电泳,可见IBDV典型双节段基因组。根据已发表的IBDV基因组序列,设计并合成了1对特异扩增IBDV VP_(2)基因的引物。以IBDV基因组为模板,利用RT-PCR技术扩增出了1.5kb的cDNA产物,将PCR产物适当处理后与经Sma I酶切的pUC19质粒平端连接,转化大肠杆菌DH5#alpha#,在含Amp、X-gal和IPTG的琼脂平板上培养,产生大量白色菌落。挑取白色菌落,经质粒大小比较分析初步筛选到一重组质粒。以重组质粒DNA为模板作PCR检测和部分酶切分析证实,该质粒为含D78 IBDV VP_(2)基因的重组pUC19。

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