非洲猪瘟病毒p30蛋白在本氏烟草中的表达及其抗体间接ELISA检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘悦

作者： 刘悦;魏天;张春雨;张建峰;王成宇;张芳毓;朱日宁;鞠安琪;王思月;曲磊;张守峰;扈荣良;梁静;王永志

作者机构：

关键词： 间接ELISA;非洲猪瘟病毒;马铃薯Y病毒;植物生物反应器;p30蛋白

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN：

年卷期： 2024 年 001 期

页码： 12-19,28

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立一种非洲猪瘟病毒（African swine fever virus, ASFV）抗体间接ELISA检测方法，利用马铃薯Y病毒（potato virus Y,PVY）介导的植物生物反应器在本氏烟草中表达ASFV p30蛋白，并以表达的蛋白作为包被抗原，对间接ELISA各反应条件进行优化。依据ASFV SY-18株的CP204L（p30）基因序列，按照本氏烟草密码子的偏好性，对p30基因（231～536 bp）的核苷酸序列进行优化、人工合成及克隆，通过In-Fusion连接技术将扩增的p30基因插入到PVY基因组的P1和HC-Pro基因之间，构建PVY-p30重组病毒质粒，以摩擦的方式将质粒接种本氏烟草叶片，14 d后，通过RT-PCR和Western blot分析目的基因的转录和重组蛋白的表达情况，并利用Ni-NTA-琼脂糖亲和层析柱纯化本氏烟草中表达的p30重组蛋白，Western blot分析p30重组蛋白的纯化效果和反应原性，将纯化后的p30重组蛋白作为包被抗原，建立ASFV抗体间接ELISA检测方法。结果显示，构建的PVY-p30重组病毒能够系统性侵染本氏烟草；p30重组蛋白能够在本氏烟草叶片中表达，且具有良好的反应原性；纯化的p30重组蛋白效果较好，能够被p30蛋白单克隆抗体识别。建立的ELISA检测方法最佳反应条件为抗原质量浓度0.5 mg/L,37℃包被1 h;待检血清1∶400倍稀释，37℃孵育0.5 h; HRP标记二抗37℃孵育0.5 h; TMB室温避光显色10 min;阴阳性临界值为0.461。当ASFV阳性血清稀释度为1∶2 560时，仍检测为阳性，具有较高的敏感性；该方法与其他常见病阳性血清不发生交叉反应，能够特异性地检测ASFV抗体；重复性试验显示批内变异系数小于5%,批间变异系数小于10%;该方法与ASFV商品化检测试剂盒相比，总体符合率为85.0%。结果表明，本研究构建的PVY-p30重组病毒载体能介导p30重组蛋白在本氏烟草中表达，以植物表达的p30重组蛋白为抗原建立的ASFV抗体间接ELISA检测方法可用于疾病的临床检测及疫情监测，同时为可饲疫苗的研发提供了基础材料。

分类号： S852.65

  • 相关文献

[1]非洲猪瘟病毒p35蛋白作为诊断抗原的抗原性比较. 施磊,田占成,杨吉飞,高闪电,独军政,赵亚茹,刘志杰,关贵全,刘光远,罗建勋,殷宏. 2021

[2]非洲猪瘟病毒p30蛋白的真核表达纯化及单克隆抗体的制备. 刘靖,钟杰,陈伟业,王晗,张经伟,步志高,华荣虹. 2021

[3]非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体制备及线性抗原表位定位. 魏天,王成宇,王凤杰,李忠鹏,张芳毓,张守峰,扈荣良,吕礼良,王永志. 2022

[4]非洲猪瘟病毒P30蛋白单克隆抗体制备、鉴定及阻断ELISA方法的建立. 张冯禧,肖琦,朱家平,尹力鸿,赵霞玲,严明帅,徐晋花,温立斌,牛家强,何孔旺. 2022

[5]非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体的制备及鉴定. 吕璐,钟秋萍,于婉琪,谢振华,张萌,刘英楠,叶建强,秦爱建,扈荣良,陈宗艳,陈鸿军. 2022

[6]非洲猪瘟病毒p30蛋白在杆状病毒表达系统中的表达与免疫检测. 廖欣欣,钟秋萍,史馨瑾,魏常青,孙海伟,刘英楠,敖清莹,谢振华,邬静,陈鸿军. 2023

[7]非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体的制备及阻断ELISA抗体检测方法的建立. 周改静,罗俊聪,石正旺,万颖,杨波,曹丽艳,宋锐,田宏,郑海学. 2022

[8]非洲猪瘟病毒p72蛋白N末端的原核表达及间接ELISA检测方法的建立. 姜林林,宋帅,蔡汝健,蒋智勇,李艳,勾红潮,楚品品,李春玲. 2021

[9]非洲猪瘟病毒p54间接ELISA抗体检测方法的建立及试剂盒研制. 岳慧贤,李其炫,惠丽丽,赵心馨,陈腾,张艳艳,王述超,缪发明,张菲,张守峰,扈荣良. 2024

[10]非洲猪瘟病毒I226R蛋白原核表达及检测I226R抗体间接ELISA方法的建立. 柯军男,张国军,岳慧贤,张艳艳,齐宇,蒋依倩,陈腾,李影,扈荣良. 2022

[11]基于非洲猪瘟病毒pA104R蛋白的间接ELISA检测方法的建立与应用. 王兆贵,赵亚茹,杨吉飞,牛庆丽,刘银光,敬梦瑶,杨赛霞,吕欣倩,刘猛,姚永海,关贵全,刘志杰,殷宏. 2021

[12]转基因可食疫苗研究策略与研究进展. 朱丽萍,颜世敢. 2011

[13]利用植物生物反应器表达抗肿瘤药物的研究进展. 姜三杰,张占路,唐益雄,吴燕民. 2011

[14]简论植物油体蛋白作为载体生产外源重组蛋白的研究. 徐妙云,刘德虎,李刚强. 2004

[15]纳豆激酶植物高效表达载体的构建. 张锋,金杰,解成骏,谭振波,杨公明. 2005

[16]抗菌肽的研究进展及在农业中的应用. 张煜,刘玮,丁汉凤,毕玉平. 2006

[17]转基因植物生产疫苗和药物的研发进展. 刘蓉蓉. 2017

[18]植物油体表达体系的研究进展. 刘昱辉,贾士荣. 2003

[19]人乳铁蛋白基因与透明颤菌血红蛋白基因在毕赤酵母中表达的研究. 孟志刚,张锐,郭红媛,孙国清,崔鑫欣,刘娜,郭三堆. 2005

[20]利用植物生产药用蛋白的进展、局限及应对策略. 袁蓓,李京生,吴燕民. 2013

作者其他论文 更多>>

微信小程序