鸡胚成纤维细胞cDNA真核表达文库的构建及鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张改平

作者： 张改平;朱礼倩;杨艳艳;赵绪永;乔松林;张红;王丽;李清州;王选年

作者机构：

关键词： 鸡胚成纤维细胞;cDNA表达文库;传染性法氏囊病毒受体

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2008 年 30 卷 03 期

页码： 216-219

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为构建鸡胚成纤维细胞cDNA真核表达文库并对文库质量进行鉴定,从鸡胚成纤维细胞中直接提取mRNA,用紫外分光光度计测定含量。经电泳确定mRNA的质量,反转录合成第一、二链cDNA,经苯酚氯仿抽提后与EcoRⅠ接头连接,经NotⅠ酶切后用spin column除去小于500 bp的cDNA片段,与经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切的真核表达质粒连接,连接产物电转化感受态细胞,测定文库的容量大小并通过colony PCR鉴定插入cDNA片段的大小。构建成含8.8×105个重组子的鸡胚成纤维细胞cDNA文库,重组子中平均插入外源片段长度大于1.0 kb的约占85.7%。从结果看构建的文库合格,适合用于筛选目的cDNA克隆。

分类号： Q78

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