非洲马瘟病毒和西尼罗病毒双重TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用
文献类型: 中文期刊
第一作者: 钱佳豪
作者: 钱佳豪;刘丹;周师众;张博源;高建帅;蒋卉;范学政;张广智;丁家波;王春凤;沈青春
作者机构:
关键词: 双重荧光定量RT-PCR;非洲马瘟病毒;西尼罗病毒
期刊名称: 畜牧兽医学报
ISSN: 0366-6964
年卷期: 2024 年 55 卷 012 期
页码: 5873-5879
收录情况: 北大核心 ; CSCD
摘要: 本研究旨在建立一种可同时检测非洲马瘟病毒(African horse sickness virus, AHSV)和西尼罗病毒(West Nile virus, WNV)的双重荧光定量RT-PCR检测方法。根据AHSV VP7基因序列和WNV Poly Protein基因的高度保守区域设计特异性引物和探针,优化反应条件及体系,绘制标准曲线,对其特异性、敏感性和重复性进行测定,并采用该方法对临床样品进行检测验证。结果显示:该方法能够同时检测AHSV和WNV,且特异性良好,与马动脉炎病毒、马疱疹病毒1型、马传染性贫血病毒、马腺疫链球菌、马流感病毒等马病核酸均无交叉反应;敏感性高,AHSV和WNV最低检测限均为10 copies·μL-1;组内变异系数为0.04%~0.93%,组间变异系数为0.17%~4.83%,重复性良好;使用该方法对30份马全血样品进行检测,结果均为阴性。本试验建立的检测方法对马属动物检疫、非洲马瘟和西尼罗热的监测与防控具有重要意义。
分类号: S852.65
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