亚洲棉(Gossypium arboreum L.)全生育期均一化全长cDNA文库的构建和鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王玉荣

作者： 王玉荣;张雪妍;刘传亮;陈亚娟;李付广

作者机构：

关键词： 亚洲棉;全生育期;均一化;cDNA文库;EST

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2009 年 42 卷 04 期

页码： 1158-1164

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】构建二倍体亚洲棉石系亚1号全生育期均一化全长cDNA文库,建立亚洲棉功能基因组学研究基础平台,发掘亚洲棉发育、抗逆等相关基因。【方法】取石系亚1号子叶期、苗期、蕾期、花铃期不同组织器官,提取总RNA并分离纯化mRNA,采用SMART技术反转录全长双链cDNA。用DSN(duplex-specificnuclease)法对全长双链cDNA进行均一化,均一化的cDNA连接到λZAPⅡ载体,包装蛋白包装后构建石系亚1号全生育期均一化全长cDNA文库。【结果】初级文库滴度4×106pfu·ml-1,库容2×106个独立克隆,重组率大于95%,插入片段平均长度大于1.5kb。随机挑取192个克隆进行EST(expressedsequencetags)测序,冗余度仅为3.49%。BLASTN比对结果显示:78.31%的EST为新EST。【结论】文库均一化效果良好,质量符合要求,可能包含大量新基因,是进行EST测序、发掘新基因等棉花功能基因组学的研究平台。

分类号： S562

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