变异猪流行性腹泻病毒(PEDV)S和N融合双基因质粒的构建及鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王隆柏

作者： 王隆柏;王晨燕;吴学敏;陈秋勇;车勇良;周伦江

作者机构：

关键词： 猪流行性腹泻病毒(PEDV);S基因;N基因;M2-S-N融合双基因

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2018 年 38 卷 12 期

页码： 2241-2246

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为构建变异猪流行性腹泻病毒(PEDV)的S和N融合双基因质粒并表达出相应的蛋白,通过扩增变异PEDV的S和N基因,将S基因连接到pEAS-Blunt M2(M2)真核表达载体,构建M2-S质粒,通过同源重组原理,采用无缝拼接试剂盒将N基因克隆至M2-S基因片段,再转化到Trans1-T1感受态细胞中,构建M2-S-N融合双基因质粒。将M2-S-N融合双基因质粒转染到293T细胞,可表达出相应的S-N融合双基因蛋白。利用RT-PCR、Western blot技术和免疫BLAB/c鼠试验鉴定载体及蛋白表达的免疫活性,结果成功构建了M2-S-N融合双基因质粒,并表达出具有免疫原性的S-N融合双基因蛋白,且该蛋白能够诱导小鼠产生特异性抗体。变异PEDV的S和N基因融合双基因质粒的构建,为进一步开展变异PEDV的诊断技术及基因工程疫苗等研究奠定良好基础。

分类号： S852.651

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