猪NLRP3基因Real-time PCR检测方法的建立及应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘博

作者： 刘博;张倩;莫玲;林盼盼;谷英华;刘海隆;蔡青云;张艳;王文秀

作者机构：

关键词： NLRP3基因;实时荧光定量PCR;猪肺炎支原体

期刊名称： 动物医学进展

ISSN： 1007-5038

年卷期： 2023 年 44 卷 009 期

页码： 19-23

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 根据NCBI NLRP3 cds(NM-001256770)序列设计1对特异性引物,构建标准品质粒pMD18T-NLRP3-189.通过反应条件优化、稳定性、敏感性等试验,成功建立了 NLRP3的SYBR Green Ⅰ real-time PCR检测方法,用该方法定量检测猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)感染后的猪肺组织中NLRP3表达水平.最佳引物浓度为0.15 μmol/L,建立的标准曲线方程为y=-3.5196x+36.968,E值为0.96,最低检测量为84个拷贝,熔解曲线有单一峰,批内变异系数CV为0.067%~0.184%,批间变异系数为0.221%~0.594%,重复性好.该方法检测仔猪在感染Mhp后肺组织中的NLRP3 mRNA表达水平,感染组与健康组相比差异显著(P<0.01),NLRP3表达水平明显增高,在感染后14 d可达到高峰,平均mR-NA拷贝数达18 000左右,可持续42 d.表明该检测方法稳定性良好,精确度高,特异性强,为进一步研究猪炎症小体NLRP3的激活及其相关炎症反应机制提供了技术支持.

分类号： S858.28

  • 相关文献

[1]猪支原体肺炎PCR诊断试剂盒的研制. 杨莉,余波,史开志,杨茂生,吴位珩. 2013

[2]贵州猪气喘病的流行病学调查. 杨莉,杨茂生,杨胜坤,刘运平,史开志,魏赐开,刘兵,刘保群,袁明娅,吴位珩. 2016

[3]不同因素对猪肺炎支原体颜色变化单位测定的影响. 韦艳娜. 2013

[4]猪肺炎支原体MY-99株的致病性. 熊焰,石谦,邓均华,苟琳. 2006

[5]猪肺炎支原体P97 TaqMan-BHQ荧光定量PCR检测方法的建立及应用. 武昱孜,靳蒙蒙,白方方,张旭,华利忠,雷治海,邵国青. 2012

[6]猪支原体肺炎防治技木. 丁卫星,王荣谈,王晶晶. 2013

[7]基于高通量测序分析肺炎支原体感染姜曲海猪肺组织miRNA表达谱. 倪黎纲,赵旭庭,王宵燕,宋成义,吴信生,甘源. 2019

[8]猪肺炎支原体主要保护性抗原的研究进展. 王文秀,王宝琴,徐晴晴,刘博,张艳. 2018

[9]猪肺炎支原体脂蛋白LppT的多克隆抗体制备及鉴定. 刘威,袁芳艳,周丹娜,刘泽文,杨克礼,段正赢,郭锐,蔡行,肖少波,田永祥. 2017

[10]苏淮猪和外来品种猪肺炎支原体血清抗体变化规律研究. 毛爱民,华利忠,冯志新,范锋,邹建波,姚黄江,缪剑岭,胡明英. 2019

[11]猪肺炎支原体PCR快速检测方法的应用研究. 柳丽,张磊,刘蓓蓓,甘源,韦艳娜,冯志新,熊祺琰,刘茂军,邵国青. 2017

[12]不同猪支原体肺炎活疫苗菌株P46和P97基因序列差异性分析. 武昱孜,邢宪平,韦艳娜,熊祺琰,冯志新,邵国青. 2017

[13]猪肺炎支原体培养技术研究. 还红华,邵国青,倪艳秀,王继春,何家惠. 2001

[14]猪肺炎支原体醛缩酶原核表达及致猪气管上皮细胞凋亡的研究. 华利忠,王世杰,马丹夫,刘茂军,冯志新,刘蓓蓓,韦艳娜,于岩飞,邵国青. 2019

[15]猪肺炎支原体气溶胶富集检测技术的建立(英文). 华利忠,高昆,武昱孜,白方方,冯志新,刘茂军,邵国青. 2013

[16]猪SUMO1基因的碱基序列特征及其在猪肺炎支原体感染过程中的表达. 王丽,杨晓阳,曹静,赵为民,涂枫,付言峰,李碧侠,陈哲,任守文,方晓敏. 2020

[17]快速直接PCR检测猪肺炎支原体方法的建立及其应用. 徐引弟,张青娴,王治方,焦文强,李海利,朱文豪,王克领. 2019

[18]猪肺炎支原体HNMhy1株免疫原性基因的鉴定与分析. 徐引弟,张青娴,王治方,焦文强,李海利,朱文豪,王克领. 2020

[19]猪肺炎支原体强毒株HNMhy1的生物学特性研究. 徐引弟,王治方,张青娴,焦文强,朱文豪,王克领. 2020

[20]2014—2018年浙江省3种猪支原体流行病学调查. 徐丽华,兰胜芝,李军星,余斌,张鹏超,李宝臣,袁秀芳. 2019

作者其他论文 更多>>

微信小程序