猪肺炎支原体P97 C末端基因重组腺病毒的构建及其免疫效果

文献类型： 中文期刊

第一作者： 陈超

作者： 陈超;李媛;郭丹;曹培丽;张美晶;姜海芳;乔祖建;王亮;辛九庆

作者机构：

关键词： 猪肺炎支原体;猪支原体肺炎;p97基因;重组腺病毒;免疫效果

期刊名称： 微生物学报

ISSN： 0001-6209

年卷期： 2009 年 49 卷 4 期

页码： 465-469

收录情况： CSCD

摘要： [目的]构建携猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)黏附因子p97 C末端基因的重组腺病毒并研究其诱导小鼠产生的免疫反应,为研制新型Mhp疫苗奠定基础.[方法]从Mhp基因组中扩增p97 C末端基因,并将其克隆到穿梭载体pShuttle-CMV中,该重组穿梭质粒经Pme I线性化后电转化到BJ5183-AD-1细胞中进行同源重组获得重组腺病毒DNA,纯化后的重组腺病毒质粒经Pac I酶切线性化后转染AD293细胞以获得重组腺病毒.对该重组腺病毒进行RT-PCR、间接免疫荧光和Western blot鉴定,用氯化铯密度梯度离心纯化试剂盒对该重组腺病毒进行纯化并确定其滴度.重组病毒经肌注、滴鼻两种途径免疫小鼠并从体液免疫、粘膜免疫和细胞免疫3个方面对其免疫结果进行分析.[结果]Pac I酶切证实同源重组成功,RT-PCR、间接免疫荧光和Western blot鉴定证明了该重组腺病毒成功转录并表达了p97 C末端蛋白,将该重组病毒进行纯化后滴度可达到5×1011TCID50/mL,重组病毒可诱导小鼠产生血清、肺匀浆液特异性IgG,通过滴鼻免疫方式还可诱导肺匀浆液SIgA的产生,但不能诱导特异的淋巴细胞增值.[结论]成功构建了表达p97末端基因的重组腺病毒,该病毒可诱发小鼠产生特异的的体液免疫和粘膜免疫,但不产生细胞免疫应答.

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