苦瓜ISSR-PCR反应体系的建立与优化

文献类型： 中文期刊

第一作者： 林珲

作者： 林珲;汪伟裁;李大忠;薛珠政;李永平;张前荣;康玉妹;温庆放

作者机构：

关键词： 苦瓜;ISSR;分子标记;PCR扩增

期刊名称： 分子植物育种

ISSN： 1672-416X

年卷期： 2018 年 04 期

页码： 1184-1189

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立适合于苦瓜的ISSR反应体系,为后续苦瓜的遗传多样性分析和亲缘关系鉴定奠定基础,本研究以"609"苦瓜品种作为模板DNA,试验采用单因素试验设计对影响反应体系的DNA模板、引物、d NTP和Taq酶的含量进行优化,并对单因素结果进行L9(33)正交试验设计。研究结果表明,苦瓜ISSR:20μL最佳反应体系为:2μL的10×Buffer(含Mg2+),30 ng模板DNA,0.25 mmol/L的d NTP,0.5μmol/L的引物,1.25 U的Taq DNA聚合酶。在此基础上,对优化引物的退火温度,确定最适宜的退火温度。验证优化的最佳反应体系,选用引物cw39132对48个苦瓜品种进行所确立扩增体系的验证,结果显示扩增产物条带清晰明亮、多态性丰富,且特异性强和重复性好,表明本研究所确定的反应体系适用于苦瓜的ISSR分子标记。

分类号： S642.5

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