重叠延伸PCR法扩增猪囊尾蚴AgB基因及其在BHK-21细胞中的表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 郭爱疆

作者： 郭爱疆;才学鹏;贾万忠;房永祥;乔军;刘红霞;潘小梅;景志忠

作者机构：

关键词： 猪囊尾蚴;AgB基因;重叠延伸PCR;真核表达;BHK-21

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2009 年 42 卷 07 期

页码： 2572-2578

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】克隆猪囊尾蚴AgB基因并在体外细胞中表达。【方法】采用RT-PCR法分别扩增AgB基因的上半段和下半段序列。采用重叠延伸PCR法(splicing overlap extension PCR method,SOE-PCR)把具有35个相同碱基的上下半段扩增为全长基因,并构建到真核表达载体pVAX1,将酶切、PCR、测序鉴定的阳性质粒经脂质体转染BHK-21细胞。通过SDS-PAGE、Western-blotting、间接免疫荧光法,检测细胞中B抗原的表达。【结果】琼脂糖凝胶电泳显示扩增的不同片段大小分别与预期的相同。重组表达载体转染BHK细胞后有荧光出现。表达的蛋白能被猪囊尾蚴病阳性血清所识别。【结论】通过重叠延伸PCR法成功扩增了AgB基因全长并构建到真核表达载体,目的蛋白在BHK-21细胞中表达。

分类号： S858.28

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