流产衣原体荧光定量PCR方法的建立及小鼠感染菌体载量测定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张志君

作者： 张志君;李兆才;娄忠子;周继章

作者机构：

关键词： Balb/c小鼠;流产衣原体;实时荧光定量PCR;绿色荧光染料

期刊名称： 中国人兽共患病学报

ISSN： 1002-2694

年卷期： 2018 年 03 期

页码： 224-229

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的建立荧光定量PCR(qPCR)对流产衣原体的检测方法。在流产衣原体灭活疫苗的生产中,代替具有主观判断影响的涂片染色疫苗效价检测方法。方法根据流产衣原体富含半胱氨酸的胞质蛋白(envB)基因保守序列设计特异性引物,利用EnvB-PMD19T阳性质粒为参考标准品,优化了反应条件,进行了敏感性、特异性及重复性试验,检测了感染流产衣原体小鼠的菌体载量。结果以重组质粒为标准品建立的标准曲线在1×10~2 copies/μL~1×10~6 copies/μL内呈现良好的线性关系,扩增效率为97%。灵敏度试验表明,该检测方法的最低检出限低至10copies/μL。组内、组间重复性试验的变异系数均小于2%,具有良好的重复性和稳定性。消化道检测到的菌体载量高于腹腔注射的菌体载量。结论本研究建立的方法能够有效的检测小鼠相应脏器的菌体含量,为流产衣原体灭活疫苗的效检提供可靠的检测方法。

分类号： S852.67

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