日本血吸虫SjELAV-like 1的克隆、表达及功能分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 许蓉

作者： 许蓉;张媛媛;李肖纯;程贵凤;何川川;郭露;李浩;刘金明;古少鹏;金亚美

作者机构：

关键词： 日本血吸虫;SjELAV-like 1;原核表达;免疫定位;RNA干扰;电镜

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2018 年 13 期

页码： 2600-2613

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】克隆和表达日本血吸虫胚胎致死异常视觉基因1(Sj ELAV-like 1),分析其在日本血吸虫体内的表达情况及定位,探究该基因对日本血吸虫形态和生殖发育的影响。【方法】利用RACE技术扩增5′/3′末端,获得Sj ELAV-like 1基因序列提交至NCBI,Gene Bank登录号:MG515727,构建该序列的重组表达质粒p ET28-Sj ELAV-like 1,并在大肠杆菌BL21中利用IPTG诱导表达,收集不同诱导时间的菌体,SDS-PAGE法进行蛋白电泳。利用His镍柱亲和层析法纯化大量表达所得重组蛋白,用纯化重组蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,用于Western blotting分析虫体内该天然蛋白的免疫原性,以及间接免疫荧光检测该蛋白在虫体内的分布情况。小鼠腹部贴片法感染日本血虫尾蚴,收集不同发育阶段混合虫体和合抱分开的雌、雄虫体,以单钉螺逸出的尾蚴感染小鼠获得25 d单性雌、雄虫体,通过荧光定量PCR分析该基因的表达情况。通过尾静脉注射小干扰RNA(si RNA)于感染小鼠体内,使该基因表达沉默,筛选最佳干扰效果的si RNA,用于长期RNA干扰(RNAi)试验,分析其对日本血吸虫雌虫产卵及卵胚孵化的影响。利用扫描电镜和透射电镜观察RNAi对虫体体被结构及雌、雄虫生殖器官的影响。【结果】获得的1 797 bp的Sj ELAV-like 1基因序列含有poly A尾,其中编码序列为1 533 bp,编码510个氨基酸。重组质粒p ET28-Sj ELAV-like 1在诱导4 h时表达量最高,主要以包涵体的形式存在,利用纯化蛋白获得了优质多抗,获得的重组蛋白具有良好的免疫原性,经分析发现Sj ELAV-like 1蛋白主要分布在虫体体被。荧光定量分析发现Sj ELAV-like 1在不同时期雌、雄虫体内均有表达,在雄虫体内表达稳定,但在雌虫体内随着发育成熟其表达水平呈下降趋势;在不同感染状态的雌、雄虫体内,与正常发育雌虫相比,该基因在发育阻遏雌虫体内高表达,而在雄虫体内无明显差异。RNAi试验中,与NC组相比,长期干扰组小鼠肝减卵率、雌虫对肝卵贡献减少率和卵胚减孵化率分别为58.27%(P<0.05)、40.59%(P<0.01)和74.58%(P<0.01);电镜观察发现,干扰组虫体体被结构改变,雄虫体表粘附的泡状物消失,立体的褶脊结构塌陷,整齐排列的条索状皮脊变的疏松,网状结构消失,雌虫体壁表面组织间隙增宽,分布于其上的体棘减少、变钝,雄虫精母细胞数目减少,其内的染色质减少,细胞肿大,细胞间隙增宽,雌虫卵黄细胞中卵黄球减少,其中包含的卵黄滴也减少,内质网肿大,皮质颗粒排列散乱。【结论】成功克隆和表达了在日本血吸虫发育阻遏雌虫中高表达的部分Sj ELAV-like 1基因序列,且该基因主要在虫体体被表达。该基因沉默使肝脏荷卵数、雌虫对肝卵贡献率和卵胚孵化率均显著降低,并改变虫体体被结构,抑制生殖腺的正常发育,提示该基因对日本血吸虫的生殖发育有重要的作用。

分类号： S852.735

  • 相关文献

[1]日本血吸虫ELAV-like 2基因的克隆、表达及功能分析. 张媛媛,许蓉,何川川,李肖纯,程贵凤,郭露,刘金明,李浩,古少鹏,金亚美. 2018

[2]日本血吸虫TOM34基因的克隆和表达分析. 洪炀,李学珍,傅志强,石耀军,陆珂,杨健美,朱传刚,苑纯秀,李浩,李祥瑞,林矫矫. 2013

[3]西花蓟马化学感受蛋白的cDNA克隆、时空表达分析及组织定位. 吴圣勇,雷仲仁. 2015

[4]干扰日本血吸虫凋亡抑制因子最佳siRNA分子的筛选. 罗荣,赵江平,胡超,程国锋. 2013

[5]日本血吸虫平衡型核苷转运蛋白3基因(SjENT3)的RNA干扰研究. 吴洛滨,任雨琪,秦芳林,刘金明,金亚美. 2021

[6]高效靶向降解烟草花叶病毒核酸的dsRNA筛选与大量制备. 徐翔,解屹,宋丽云,申莉莉,李莹,王勇,刘明宏,刘东阳,王小彦,赵存孝,王凤龙,杨金广. 2021

[7]象耳豆根结线虫Me-mapk1基因的克隆及RNAi分析. 魏丽莎子,龙海波,陈绵才,赵志祥. 2016

[8]编码日本血吸虫CIAPIN1 cDNA的克隆及其重组蛋白的原核表达. 罗荣,于金波,周春景,杨德浩,程国锋. 2011

[9]编码日本血吸虫CIAPIN1cDNA的克隆及其重组蛋白的原核表达. 罗荣,于金波,周春景,杨德浩,程国锋. 2011

[10]原核表达重组蛋白rSjPP的酶学活性分析. 姚利晓,林矫矫,夏艳勋,刘金明,傅志强. 2006

[11]日本血吸虫PDIA3的原核表达和多抗血清制备. 刘群,段明明,苑纯秀,李丹丹,葛程,马丽贞,冯新港. 2015

[12]编码日本血吸虫Akt蛋白的cDNA克隆及原核表达. 周春景,罗荣,石耀军,丁硕,杨德浩,程国锋. 2011

[13]日本血吸虫WD40信号蛋白的原核表达. 罗荣,周春景,石耀军,赵江平,程国锋. 2012

[14]香蕉叶片发育过程中不同甲酯化程度果胶的变化. 范韦,李小泉,陈厚彬,谢玲,刘静,吴茜,袁梦,徐春香. 2016

[15]高温胁迫对水稻光合PSⅡ系统伤害及其与叶绿体D1蛋白间关系. 杨卫丽,黄福灯,曹珍珍,雷炳婷,胡东维,程方民. 2013

[16]间隙连接蛋白类似物在蚕豆叶肉细胞原生质体上的定位. 潘照明,娄成后. 1996

[17]高温胁迫对水稻光合PSII系统伤害及其与叶绿体D1蛋白间关系. 杨卫丽,黄福灯,曹珍珍,雷炳婷,胡东维,程方民. 2013

[18]马尾松毛虫质型多角体病毒结构蛋白的抗体制备及免疫性. 靳亮,王洪秀,刘金瑾,王金昌,张莉莉. 2014

[19]牦牛肠黏膜浆细胞、肥大细胞与杯状细胞的比较观察. 杨学军,方梅,左愈臻,李栋,赵兴绪,贾宁. 2015

[20]类猪圆环病毒P1 VP1蛋白在昆虫细胞中的表达及特性分析. 王凤芝,温立斌,何孔旺,姚火春,王小敏. 2015

作者其他论文 更多>>

微信小程序