非洲猪瘟病毒E301R蛋白单克隆抗体的制备及其初步应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘学敏

作者： 刘学敏;张元峰;王永琦;康力;黄丽;翁长江

作者机构：

关键词： 非洲猪瘟病毒;E301R蛋白;单克隆抗体;抗原表位

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN：

年卷期： 2022 年 009 期

页码： 963-969

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为制备非洲猪瘟病毒（ASFV）E301R蛋白单克隆抗体（MAb），本研究通过原核表达系统表达并纯化了重组E301R蛋白（r E301R）。将其免疫BALB/c小鼠并通过间接ELISA方法筛选到1株能够稳定分泌E301R蛋白MAb的杂交瘤细胞株8B3，亚类鉴定结果显示8B3 MAb为IgG1型。利用一系列表达部分重叠的重组E301R片段并经western blot鉴定8B3 MAb识别的抗原表位，结果显示，8B3 MAb识别的抗原表位为~1MSEDIRRGPGRPPKKRVVPN20。采用western blot检测制备的8B3 MAb与HEK293T细胞中过表达的E301R蛋白（不同剂量）及ASFV感染猪肺泡巨噬细胞（PAMs）后（感染后不同时间）天然表达的E301R蛋白的反应性；采用间接免疫荧光试验（IFA）检测8B3 MAb与293T细胞中过表达的E301R蛋白的反应性及E301R蛋白在细胞中的定位。Western blot结果显示，过表达E301R蛋白的293T细胞出现了36 ku左右的特异性条带，且随着转染质粒量的增加，蛋白表达量增加；感染ASFV的PAM中（感染后8 h）出现了36 ku左右的特异性条带，且随着感染时间的延长，蛋白表达量增加。IFA结果显示，在过表达E301R蛋白的293T细胞中出现绿色荧光，且其定位于细胞质中。以上结果表明，制备的8B3MAb既能够与过表达的E301R蛋白，也能够与天然表达的E301R蛋白反应，反应性较强。将8B3 MAb用于免疫共沉淀（Co-IP）试验检测293T细胞中过表达的E301R蛋白和Flag-Agarose结合后与8B3 MAb的反应性。结果显示，8B3 MAb可以检测到结合在Flag-Agarose上的E301R蛋白，出现约36 ku的特异性条带。表明8B3 MAb可以用于Co-IP试验。这些研究结果为进一步研究E301R蛋白的功能奠定实验基础。

分类号： S852.651

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