H5亚型禽流感病毒HA基因杆状病毒载体的构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 熊蕊

作者： 熊蕊;邓国华;黎玉梅;冉多良;陈化兰

作者机构：

关键词： H5;禽流感病毒;HA基因;重组杆状病毒

期刊名称： 黑龙江畜牧兽医

ISSN： 1004-7034

年卷期： 2007 年 05 期

页码： 18-20

收录情况： 北大核心

摘要： 经过PCR反应,以特异性引物扩增了禽流感病毒DK/Zhejiang/11/00(H5N1)去除信号肽的HA基因,克隆到杆状病毒转移载体pFastBac-HTA中,阳性重组质粒转座DH10Bac感受态细胞,通过蓝白斑筛选、PCR鉴定获得阳性克隆,碱裂解法提取阳性质粒,转染sf 9昆虫细胞,获得含H5亚型禽流感病毒HA基因的重组杆状病毒H5HA-Bac HTA。利用SDS-蛋白酶K方法提取重组病毒DNA,PCR反应证实HA基因片段已重组到杆状病毒基因组中。以适宜剂量的重组杆状病毒接种sf 9昆虫细胞,待绝大部分细胞产生细胞病变后收获细胞。细胞裂解产物经间接免疫荧光、SDS-PAGE及Western-Blot试验检测,结果表明:H5亚型禽流感病毒HA基因在重组杆状病毒H5HA-Bac-HTA感染sf 9细胞后获得高效表达,且具有良好的蛋白活性及特异免疫反应原性。

分类号： S852.65

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