番鸭IFN-α mRNA实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 万春和

作者： 万春和;朱海侠;陈红梅;施少华;傅光华;程龙飞;黄瑜

作者机构：

关键词： 实时荧光定量RT-PCR;番鸭;IFN-α;β-actin

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2012 年 20 卷 04 期

页码： 63-68

摘要： 根据GenBank中鸭IFN-α基因(GenBank登录号:JF894229)序列设计并合成引物,并以鸭β-actin基因(GenBank登录号:GU564232)为内参,采用SYBR Green I染料法,建立检测鸭IFN-αmRNA的实时荧光定量Real-time PCR方法(RT-PCR)。将IFN-α和β-actin基因分别克隆至pMD18-T载体上,鉴定出阳性重组质粒为标准品(p-IFN-α和p-β-actin),分别建立番鸭IFN-α和β-actin实时荧光定量RT-PCR方法。结果表明,Ct值在13.27~27.54与11.86~25.32范围内呈现良好的线性关系,相关系数均大于0.99(r>0.99),扩增产物的熔解曲线分析均各自只出现1个特异性单峰,无引物二聚体,Tm值分别为(93.6±0.26)℃和(85.3±0.15)℃,最低检测限分别为9.37×102copies/μL和3.71×101copies/μL,检测周期从样品的处理到荧光定量PCR结束仅需4 h左右。本研究建立的鸭IFN-α基因实时荧光定量PCR灵敏度高、特异性强、检测周期短,为番鸭IFN-αmRNA的定量分析奠定了基础。

分类号： R440

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