环糊精水解酶cds1-3底物通道氨基酸的定点突变研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 汤宏赤

作者： 汤宏赤;莫莉;闭海;林丽华;郭媛;庞浩

作者机构：

关键词： 环糊精水解酶;同源建模;底物通道;定点突变;蛋白结构;氨基酸

期刊名称： 广西科学

ISSN： 1005-9164

年卷期： 2019 年 004 期

页码： 410-417

摘要： 本研究对具有大分子水解能力的环糊精水解酶cds1-3的蛋白结构进行分析,选取底物通道相关氨基酸进行定点突变.通过比较突变酶和野生酶的功能差异,定位决定cds1-3特殊功能的氨基酸.采用sybyl 1.2进行蛋白质底物结合分析,选取和多聚体形成、底物结合以及底物通道相关的氨基酸Glu66、Pro48、Phe289为突变位点,反向PCR构建pSE380/E66G、pSE380/P48H、pSE380/F289A表达质粒并进行表达,获得酶活突变体并与原始酶进行底物特异性比较分析.其结果显示,突变酶E66G降解大分子底物木薯淀粉和支链淀粉的相对酶活力分别提高26.96%和23.15%,而对小分子底物普鲁兰糖的水解能力下降13.14%.因此,cds1-3是一个能水解大分子底物的特殊环糊精水解酶,氨基酸Glu66是cds1-3水解大分子支链淀粉的关键氨基酸之一.

分类号： Q556

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