文献类型： 中文期刊
第一作者： 张子豪
作者： 张子豪;郭朝辉;张美娜;洪佳乐;于光晴;董鹏生;黄小城;杨振江;王延晖;李明;刘变枝
作者机构：
关键词： β-伴大豆球蛋白;肠道上皮细胞;内质网应激;黄颡鱼
期刊名称： 水生生物学报
ISSN： 1000-3207
年卷期： 2024 年 48 卷 011 期
页码： 1894-1904
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 实验旨在利用β-伴大豆球蛋白构建黄颡鱼上皮细胞内质网应激(Endoplasmic reticulum stress,ERS)模型.利用酶消化法分离得到黄颡鱼肠道上皮细胞,通过细胞形态、角蛋白18(Cytokeratin-18,CK-18)免疫荧光染色和碱性磷酸酶染色法鉴定.利用不同浓度β-伴大豆球蛋白刺激24h后,RT-qPCR检测相关基因转录表达水平,筛选最合适刺激浓度.在此浓度下分别刺激黄颡鱼肠道上皮细胞0、12h、24h和36h,使用RT-qPCR、CCK8、透射电镜和免疫荧光染色等方法检测相关指标,筛选最适刺激时间.结果表明:(1)成功分离培养黄颡鱼肠道上皮细胞,细胞呈铺路石状,CK-18和碱性磷酸酶染色呈阳性;(2)成功筛选到4 mg/mL β-伴大豆球蛋白为最佳刺激浓度.在该浓度下,除grp78、jnk、il-10、atf6外,内质网应激、自噬、凋亡、炎症等相关基因表达水平均显著最高(P<0.05);成功筛选24h为最适刺激时间.4 mg/mL β-伴大豆球蛋白刺激细胞24h显著降低细胞活力,同时引起内质网显著肿胀,GRP78、LC3、Caspase3蛋白表达和Tunel信号显著升高(P<0.01),perk、atf6、beclin1、lc3a、bcl2、caspase3、caspase9和il-12mRNA表达水平显著最高(P<0.05).综上,实验成功分离得到黄颡鱼肠道上皮细胞,构建了黄颡鱼肠道上皮细胞内质网应激模型.实验为进一步研究未折叠反应信号通路在黄颡鱼豆粕诱导肠炎发生发展中的作用奠定基础.
分类号： Q172
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