抗真菌蛋白Rs-AFP_2基因定点突变及其对大肠杆菌中表达的影响

文献类型： 中文期刊

第一作者： 朱建清

作者： 朱建清;刘柱;胡新文;杨志荣

作者机构：

关键词： 萝卜抗真菌蛋白(Rs-AFP_2);定点突变;密码偏爱性;表达

期刊名称： 高技术通讯

ISSN： 1002-0470

年卷期： 2003 年 13 卷 04 期

页码： 18-23

收录情况： EI ; CSCD

摘要： 为了研究遗传密码子对表达调控的影响,利用PCR重叠延伸法,对萝卜抗真菌蛋白Rs-AFP2基因编码序列区的部分核苷酸进行沉默突变,构建突变体Rs-AFPm。序列分析表明,PCR产物全长240bp,有一个阅读框,编码的蛋白由29个氨基酸的信号肽和51个氨基酸的抗真菌蛋白组成。突变体与突变前的Rs-AFP2基因相比,在编码区第3号氨基酸Lys相差一个碱基(TTG→TTA),第5号氨基酸Gln相差一个碱基(CAG→CAA),第6号稀有密码子Arg相差两个碱基(CAG→CGA)。重新合成引物,将切除信号肽的Rs-AFP2基因和Rs-AFPm基因与原核表达载体pET-21b(+)分别重组到大肠杆菌BL21菌株。IPTG诱导后,二者均得到了表达。软件分析显示,突变前pETAFPo表达产物占全菌蛋白的3％,突变后pETAFPm的表达产物占全菌蛋白含量的8％;表达蛋白主要以包涵体的形式存在,包涵体经超声波破碎后,蛋白质复性,抑菌结果表明,pETAFPm表达产物的抑菌半径大于pETAFP2表达产物的抑菌半径。这些都说明改造后的Rs-AFPm基因与Rs-AFP2基因相比,已有效地提高表达量。

分类号： Q75

  • 相关文献

[1]牛IL-2cDNA缺失突变的矫正及表达产物生物学活性测定. 李春华,李祥瑞,魏晓锋,徐立新,李震,陈芳. 2003

[2]新城疫病毒SX-1株F基因定点突变及真核表达研究. 李红丽,詹丽娥,张伟业,王彩先,唐娟,陆冰洋. 2011

[3]猪肺炎支原体P46基因的克隆及表达. 迟灵芝,刘茂军,冯志新,单虎,邵国青. 2008

[4]A型产气荚膜梭菌α毒素His-68基因的定点突变与结构分析. 许崇波,樛跃,许崇利,高凤山,窦永喜,才学鹏. 2010

[5]植物基因定点突变与定点置换技术及其在植物遗传改良中的应用. 张晓辉,叶志彪,张余洋,侯政,李汉霞. 2007

[6]利用重叠延伸PCR定点突变衰退病P23基因. 阳佳位,王淼,程春振,魏召新,陈凤娟. 2009

[7]猪TLR5基因定点突变表达载体构建. 李海涛,陈月婵,牛艳春,李朋,刘娣,杨秀芹. 2012

[8]谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)海藻糖合成酶的定点突变及其酶学性质研究. 陈发忠,罗兆飞,韦宇拓,杜丽琴,王青艳,黄日波. 2012

[9]定点突变Ca~(2+)平衡位点对粘质沙雷氏菌脂肪的影响. 陈小玲,黄俊. 2017

[10]地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)外切葡聚糖酶CelB基因的发掘及功能鉴定. 陈燕,吴倩倩,刘春宇,郭媛,林丽华,黄日波. 2013

[11]一种载体构建的新方法:重组融合PCR法. 李玉,严红,马立新. 2012

[12]金黄色葡萄球菌新型耐热核酸酶(Nuc2)的定点突变与特性分析. 陈丽敏,施春雷,王大鹏,张道锋,史贤明. 2015

[13]唾液乳杆菌BSH1及其突变体的底物特异性. 毕洁,方芳,仇钰莹,杨庆利,陈坚. 2014

[14]微小毛霉凝乳酶基因定点突变及其酶学性质. 李玉秋,谭化,李达,刘洪霞,李倬林. 2015

[15]环糊精水解酶cds1-3底物通道氨基酸的定点突变研究. 汤宏赤,莫莉,闭海,林丽华,郭媛,庞浩. 2019

[16]猪miRNA-101真核表达载体的构建及定点突变. 张姣,邵思宇,李利族,汪亮,刘娣,杨秀芹. 2015

[17]碱基编辑器介导的猪IGF2基因高效定点突变. 王煜,宋瑞高,赵建国,王彦芳. 2020

[18]口蹄疫病毒反向遗传操作和病毒空衣壳组装. 刘在新,李平花,曹轶梅,卢曾军,白兴文,孙普,郭建宏,刘湘涛,殷宏. 2008

[19]木聚糖酶的基因挖掘及分子改良研究. 罗会颖,王坤,李中媛,黄火清,王国增,姚斌. 2013

[20]重组猪α干扰素基因定点突变及在大肠杆菌中的表达. 陈涛,于瑞嵩,刘惠莉,李震,曹祥荣. 2002

作者其他论文 更多>>

微信小程序