马铃薯腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶小亚基基因(sAGP)的克隆及其在毕赤酵母中的表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 宋波涛

作者： 宋波涛;柳俊;谢从华;成善汉

作者机构：

关键词： 马铃薯sAGP克隆;酵母表达;酶活性

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1006-1304

年卷期： 2005 年 13 卷 03 期

页码： 282-287

收录情况： CSCD

摘要： 用RT-PCR结合RACE的方法,在腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶小亚基基因(sAGP)的保守位点设计1对引物,从低温处理的马铃薯(SolunumtaberosusL.)块茎cDNA中,扩增出1条约1.9kb的特异性条带,并将其克隆到pBluescriptSKⅡ载体。DNA序列测定结果表明,目标片段为sAGP,全长为1854bp,包含一个1563bp的开放阅读框架,编码521个氨基酸。5'端有63bp的非翻译区,3'端包含219bp的非编码序列,3'端poly(A)尾端上游12和19bp处有加尾信号AATAAA。该基因已在GenBank注册,登记号为AY186620。将该基因PCR突变后,克隆到酵母表达载体pMETα-B中,构成表达载体pMETαA4,将其线性化,用电穿孔法导入Pichia-methabolicapMAD16,得到重组表达酵母,经甲醇诱导表达后,SDS-PAGE电泳显示,在诱导表达重组酵母中检测到50kD左右的特异蛋白带。裂解酵母菌体提取蛋白质,进行酶活力活性测定,结果表明诱导表达重组酵母中AGPase活性明显上升,证明诱导表达成功。

分类号： S532

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