鳗鲡疱疹病毒ORF87基因克隆及其多克隆抗体的制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 陈曦

作者： 陈曦;杨金先;李英英;陈强;黄小红;宋铁英;葛均青

作者机构：

关键词： 鳗鲡疱疹病毒(AngHV);ORF87基因;原核表达;多克隆抗体;免疫原性

期刊名称： 南方农业学报

ISSN： 2095-1191

年卷期： 2022 年 53 卷 002 期

页码： 538-545

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [目的]克隆鳗鲡疱疹病毒(Anguillid herpesvirus,AngHV)ORF87基因,分析其序列特征并制备多克隆抗体,为揭示ORF87基因在AngHV侵染过程中的作用机制提供技术支持.[方法]根据GenBank已公布AngHV参考株(NC_013668)的ORF87基因序列设计引物,从AngHV-FJ株基因组中扩增出ORF87基因,构建重组质粒pMD19-ORF87经酶切鉴定和测序验证后,采用Softberry、ProtParam、CDD、TMHMM、SignalP 5.0、PSORT及BepiPred等在线软件进行生物信息学分析;将ORF87基因克隆至pET-32a表达载体上,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE检测及Western blotting鉴定;以纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备ORF87多克隆抗体.[结果]克隆获得的AngHV-FJ株ORF87基因为2127 bp,与GenBank已发布的参考序列高度同源(相似性为99.72%),仅存在4个碱基突变;其编码蛋白分子量为80.1 kD,理论等电点(pI)为7.62,不稳定系数为42.38,总平均亲水性为-0.271.ORF87蛋白具有蛋白激酶C超家族(PKC-like Superfamily)的保守结构域,但不具信号肽和跨膜结构域;其亚细胞定位可能位于细胞核和细胞质膜,存在19个潜在B细胞抗原表位,即具有良好的免疫原性.AngHV-FJ株ORF87基因可在大肠杆菌中高效表达,表达获得的融合蛋白约100.0 kD,主要以包涵体形式存在;以融合蛋白免疫新西兰大白兔制备获得的ORF87多克隆抗体效价达1:16000,能特异性识别AngHV的ORF87蛋白.[结论]AngHV-FJ株源ORF87基因经原核表达载体诱导表达获得的融合蛋白ORF87具有Serine/threonine蛋白激酶活性,以其免疫新西兰大白兔制备获得的ORF87多克隆抗体具有高效价,能特异性识别AngHV感染,可作为亚细胞定位及表达时相分析等蛋白特性研究的工具,用于解析ORF87基因在AngHV侵染过程中的作用.

分类号： S941.41

  • 相关文献

[1]鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF25截短蛋白的多克隆抗体制备与免疫原性分析. 周勇,史玉恒,范玉顶,刘文枝,江南,赵建青,许晨,曾令兵. 2018

[2]鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF25截短蛋白的多克隆抗体制备与免疫原性分析. 周勇,史玉恒,范玉顶,刘文枝,江南,赵建青,许晨,曾令兵. 2018

[3]牛支原体MBOVPG45_0212的原核表达及其免疫原性分析. 白宇彤,黄志成,李章程,陈胜利,兰仕梅,李延召,刘爽,郝华芳,储岳峰,刘冠慧. 2022

[4]鳗鲡疱疹病毒ORF115基因克隆、转录时相分析及原核表达. 陈曦,杨金先,陈华,陈强,葛均青. 2023

[5]赤点石斑鱼神经坏死病毒主衣壳重组蛋白多克隆抗体的制备. 苏友禄,郭志勋,冯娟,闫云锋,喻达辉. 2010

[6]非洲猪瘟病毒H108R蛋白的制备及其免疫原性评价. 张越,茹毅,郝荣增,杨锐,赵陇和,李亚军,杨洋,张荣,蒋成辉,郑海学. 2025

[7]大鲵虹彩病毒贵州分离株MCP基因的克隆与原核表达. 余波,王芳,康超,李永霞,周思旋. 2017

[8]罗非鱼无乳链球菌C5a肽酶(ScpB)的原核表达及其免疫原性. 李庆勇,可小丽,卢迈新,朱华平,高风英,刘志刚. 2014

[9]丝状支原体山羊亚种特异性蛋白基因Mmc-3740的克隆表达和免疫原性分析. 张靖鹏,江锦秀,林裕胜,游伟,胡奇林. 2019

[10]1型鸭疫里默氏杆菌p25蛋白基因(p25)的克隆表达及免疫学活性. 齐冬梅,袁建丰,覃宗华,吴彩燕,谢明权. 2011

[11]弓形虫胚层发育相关蛋白的原核表达及免疫原性研究. 田维鹏,张念章,高琦,鲁力,朱兴全,宋铭忻. 2014

[12]美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7的原核表达及免疫原性分析. 欧云文,马炳,马小元,王俊,丁耀忠,张永光,张杰. 2017

[13]奥利亚罗非鱼促性腺激素释放激素cDNA的原核表达及其免疫原性研究. 丁炜东,曹丽萍,吴婷婷. 2006

[14]副鸡禽杆菌lpxM蛋白的原核表达及免疫原性研究. 梁之瑄,梅晨,张雪,徐浩钧,支岩,李焕荣,王宏俊. 2024

[15]绵羊肺炎支原体核糖体蛋白30S RPS11基因的克隆、表达及重组蛋白免疫原性研究. 田路路,孟庆玲,乔军,才学鹏,陈创夫. 2017

[16]A型禽流感病毒M2蛋白胞外功能区(M2e)基因的原核表达和免疫原性分析. 张新涛,刘明,杜金玲,刘春国,李洪涛,孙恩成,石薇琳. 2010

[17]犬细小病毒SH14株VP2基因原核表达及免疫原性分析. 唐井玉,李传峰,宫晓华,李琦,丁明洋,陈宗艳,王桂军,刘光清. 2016

[18]布鲁氏菌Cu/Zn-SOD基因的原核表达及其免疫原性分析. 覃晓琳,乔祖健,胡森,刘文兴,赵云,李继昌,步志高. 2013

[19]牛轮状病毒VP4基因与LTB基因的融合表达及免疫原性研究. 南晓伟,杨少华,高运东,王长法,杨宏军,刘晓,何洪彬,申之义,仲跻峰. 2010

[20]罗非鱼无乳链球菌Sip基因的克隆、表达及免疫原性分析. 黎炯,叶星,可小丽,卢迈新,迟妍妍,田园园. 2012

作者其他论文 更多>>

微信小程序