大片吸虫成虫cDNA文库的构建和组织蛋白酶L1基因的克隆

文献类型： 中文期刊

第一作者： 郭敏

作者： 郭敏;徐梅倩;岳城;何国声

作者机构：

关键词： 大片吸虫;cDNA文库;组织蛋白酶L1

期刊名称： 中国兽医寄生虫病

ISSN： 1005-0868

年卷期： 2007 年 15 卷 03 期

页码： 25-28

摘要： 目的大片吸虫cDNA文库的构建及组织蛋白酶L1(Fasciola gigantica Cathepsin L1,FgCL1)基因的克隆。方法提取大片吸虫成虫总RNA,运用SMART技术构建大片吸虫cDNA文库。根据文献设计并合成PCR引物,从上述文库中克隆大片吸虫FgCL1基因,定向克隆至原核表达载体pET28a中。结果文库容量为2.08×106pfu/mL,重组率为98%。扩增后的文库滴度为6.23×109 pfu/mL,插入片段平均大小约为1 000 bp。应用两个已知基因(FgCL1 FgGST)从文库中成功钓取到相应的全长基因。将含有FgCL1的阳性克隆测序,用Genebank Blast进行序列比较,证实为FgCL1基因。结论成功构建了cDNA文库,提供筛选大片吸虫基因资源;从该文库中克隆出FgCL1,为进一步表达该基因,研制诊断试剂盒创造了条件。

分类号： S852.7

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