口蹄疫病毒样颗粒诱导表达型载体的构建及其BHK-21细胞池的筛获

文献类型： 中文期刊

第一作者： 谭书桢

作者： 谭书桢;董虎;孙世琪;郭慧琛

作者机构：

关键词： 口蹄疫病毒;病毒样颗粒;质粒构建;细胞池;诱导表达

期刊名称： 生物工程学报

ISSN：

年卷期： 2023 年 012 期

页码： 4849-4860

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 瞬时表达是目前利用哺乳动物细胞表达口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus,FMDV）衣壳蛋白的主流方法。为实现染色体稳定表达FMDV衣壳蛋白并高效组装出病毒样颗粒（virus like particles,VLPs），本研究构建了piggy Bac （PB）转座-组成型表达、PB转座-四环素（tetracycline,Tet）诱导型表达两套质粒。利用荧光蛋白标记技术，验证了质粒的功能。通过抗生素筛选得到了组成型表达P12A3C （WT/L127P）基因的BHK-21细胞池（C-WT、C-L127P）和诱导型表达P12A3C （WT/L127P）基因的BHK-21细胞池（I-WT、I-L127P）。荧光观察和PCR检测证明了绿色荧光蛋白、3C蛋白酶、反向四环素转录激活因子等基因的稳定整合。Western blotting、酶联免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）实验证明了细胞池I-L127P具有更强的衣壳蛋白和VLPs生产能力。本研究首次实现了哺乳动物细胞染色体诱导表达FMDV衣壳蛋白，有助于推动哺乳动物生产FMDV VLPs疫苗的技术工艺，也为构建其他蛋白的哺乳动物细胞诱导型表达系统提供了参考。

分类号： S852.65

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