鹅多瘤病毒VP1基因的克隆及EvaGreen实时荧光定量PCR方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 万春和

作者： 万春和;刘荣昌;程龙飞;施少华;傅光华;陈红梅;傅秋玲;陈翠腾;黄瑜

作者机构：

关键词： 鹅多瘤病毒;VP1基因;EvaGreen实时荧光定量PCR方法;樱桃谷鸭;麻鸭

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2018 年 38 卷 12 期

页码： 2289-2295

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 针对鹅多瘤病毒(goose hemorrhagic polyomavirus,GHPV)VP1基因核苷酸序列设计并合成1对特异性引物,从1株樱桃谷鸭源GHPV(命名为FJ201601株)扩增获得VP1基因核苷酸序列全长,并进行核苷酸同源性比较和遗传进化分析,明确其VP1基因分子特征。基于GHPV各分离株VP1基因特点,设计特异性的实时荧光定量PCR引物,建立基于EvaGreen实时荧光定量PCR检测GHPV方法。结果显示,克隆的FJ201601株VP1基因全长为1 062bp,与GHPV各参考分离株核苷酸同源性为99.7%～100.0%;在遗传进化上可将GHPV分为2个大的遗传进化分支(Clade 1和Clade 2),FJ201601株属于Clade 2分支。建立的EvaGreen检测GHPV实时荧光定量PCR检测方法,其标准曲线方程y轴截距为39.12,斜率为-3.489,扩增相关系数为0.996,扩增效率为99.7%;敏感性强,最低检测限为88.0拷贝/μL;特异性好,扩增产物的溶解曲线分析只出现单一的特异峰,Tm值为(82.18±0.22)℃,无引物二聚体,对水禽常见病原检测均为阴性;重复性好,组内变异系数和组间变异系数分别为0.62%～1.76%和0.92%～2.44%。用建立的检测方法对80份多品种生长不良鸭进行检测发现4份阳性(樱桃谷鸭2份、麻鸭2份),阳性率为5%(4/80)。本研究证实麻鸭中存在GHPV感染,为丰富GHPV感染宿主谱和开展GHPV感染流行病学调查和致病机理研究提供检测手段。

分类号： S852.65

  • 相关文献

[1]一起青年麻鸭感染禽坦布苏病毒的诊断. 代芝艺,张瑞,岳稳,郑小兰,王艺萍,刘荣昌,黄瑜. 2020

[2]麻鸭磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶高效可溶性表达及其部分酶学性质. 王晶晶,张新笑,卞欢,耿志明,李鹏鹏,王道营,徐为民. 2019

[3]圈养条件下麻鸭日粮中添加菹草对产蛋率和蛋黄着色的影响. 丁思,杨红建,萨仁娜,芮巧云,张宏福. 2010

[4]开产麻鸭坦布苏病毒感染的诊断. 谢海军,林贵富,蔡小敏,陈红梅,傅光华. 2014

[5]稻鸭共作技术的研究. 赵国臣,侯立刚,曹忠,赵法江,隋鹏举. 2005

[6]安徽省巢湖麻鸭疫病流行现状及其防治技术. 赵瑞宏,张丹俊,詹凯,潘孝成,程宝艳,胡晓苗. 2009

[7]蛋氨酸水平对开产期麻鸭产蛋性能、蛋品质及卵巢形态的影响. 阮栋,林映才,张罕星,马现永. 2012

[8]鸭坦布苏病毒试验感染麻鸭的组织病理学研究. 陈雷,傅光华,祁保民,施少华,万春和,程龙飞,陈红梅,傅秋玲,黄瑜. 2013

[9]发挥资源优势有效推进水禽产业发展. 侯水生,陈育新. 2007

[10]麻鸭对稻鳖共作田杂草防治和水稻产量及品质的影响. 王显,胡中泽,衣政伟,张自常,孙飞,杨大柳. 2022

[11]无特定病原体麻鸭种群的建立. 韩凌霞,赵丽丽,于海波,张伟,张圆圆,陈洪岩. 2018

[12]麻鸭钙非依赖性磷脂酶A2ε(iPLA2ε)的克隆和表达纯化. 张玉梅,李鹏鹏,王晶晶,王道营,徐为民. 2018

[13]麻鸭HSP90α基因的原核表达、纯化及磷脂结合活性的鉴定. 张玉梅,李鹏鹏,张牧焓,王晶晶,王道营,徐为民. 2018

[14]稻鸭共作与圈养模式对麻鸭生长性能影响的比较研究. 冯杯仪,王国霞,刘文俊,郑春田,张亚男,王爽,夏伟光,金成龙,吕艳涛,陈伟. 2024

[15]麻鸭脂肪氧合酶的分离纯化及其性质研究. 陈欣,姚忠,徐为民,孙芸,王道营. 2013

[16]不同微生态制剂对樱桃谷鸭生长性能的影响. 龚萍,叶胜强,陈星,王丽霞,皮劲松,喻凌寒,陈燕英,刘雄涛,杨宇. 2019

[17]樱桃谷鸭种公鸭睾丸发育和生殖轴基因表达. 陈蓉,雷明明,何宗亮,朱欢喜,戴子淳,应诗家. 2021

[18]北京鸭与樱桃谷鸭的分子遗传关系分析. 刘伟,杨方喜,贾亚雄,易国强,陈余,曲鲁江. 2011

[19]丁酸钠和半胱胺对樱桃谷鸭生长性能、肉品质和血清生化指标的影响. 蒋兵兵,王珍珍,王源,李浙烽,郑强,沈军达,刘银兰,曾涛,李海英,卢立志. 2020

[20]复合微生态制剂对樱桃谷鸭生长性能、屠宰性能、肉品质和血清指标的影响. 张萌慧,于阿男,陈黎,武洪志,郑强强,李浙烽,王正,熊小兰,卢立志,李建慧. 2023

作者其他论文 更多>>

微信小程序