枯草芽孢杆菌B111中性蛋白酶基因BS2在毕赤酵母中的表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 白玮

作者： 白玮;张锐;郭三堆

作者机构：

关键词： 枯草芽孢杆菌;中性蛋白酶;抗菌活性;毕赤酵母表达

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2009 年 42 卷 03 期

页码： 876-883

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】为开发抗病基因和生物农药新资源,纯化鉴定枯草芽孢杆菌B111分泌的抗棉花黄萎病菌蛋白质,克隆其编码基因,并分析在毕赤酵母中的表达特性。【方法】通过超滤浓缩、90%硫酸铵沉淀、葡聚糖凝胶QAE-A50强阴离子交换柱洗脱及冻干等步骤,分离纯化抗菌蛋白。采用联机反相毛细管柱液相色谱电喷雾串联质谱,鉴定抗菌蛋白种类。克隆包含前导区序列在内的抗菌蛋白基因序列,构建表达载体pPIC9K-PT,转化毕赤酵母GS115。转化子经PCR鉴定,甲醇诱导表达产物经中性蛋白酶活性和抗菌活性检测验证功能。【结果】纯化鉴定了一个来源于枯草芽孢杆菌B111的抗菌中性蛋白酶BS2。克隆了包含前导区序列在内的抗菌蛋白基因BS2,并在毕赤酵母中获得有效表达。重组BS2蛋白分子量约69kD,表达水平29.77mg·L-1,水解酪素酶活力27800U·g-1,并显示抗黄萎病菌活性。【结论】纯化鉴定了一个具有抗菌活性的枯草芽孢杆菌中性蛋白酶BS2,克隆其编码基因BS2,并成功实现在酵母中的有效表达。

分类号： S476

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